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专题一 1.2基因工程的基本操作程序 2015/4/1 葛鹏强 【学习目标】 基因工程的原理及技术 【知识梳理】 一、目的基因的获取 (1)目的基因：_________ _。 (2)获取目的基因的方法： 1、从基因文库中获取目的基因 ① 基因文库：将含有某种生物不同基因的许多 ，导人受体菌的群体中 ，各个受体菌分别含有这种生物的不同基因，称为基因文库。 基因组文库：含有一种生物的 基因 ② 种类 cDNA文库：含有一种生物的 基因 ③ 目的基因的获取 根据基因的有关信息：基因的 序列、基因在 上的位置、基因的 产物mRNA、基因的 产物蛋白质等特性获取目的基因。 2、利用PCR技术扩增目的基因。 ① PCR：是一项在生物体外 特定DNA片段的核酸合成技术。 ② 条件：已知目的基因的 序列。 ③ 过程：目的基因DNA受热形成 ，与 结合，然后在 ____的作用下进行延伸形成DNA。 ④ 方式：指数扩增=2n（n为扩增循环的次数） 3、人工合成目的基因：常用方法有 和 。 二、基因表达运载体的构建（基因工程的核心） (1)目的：使目的基因在受体细胞中__________，并且可以__________，使目的基因能够________ __。 (2)组成：__________＋__________＋__________＋__________ ①启动子：是一段有特殊结构的__________，位于基因的__________，是__________识别和结合的部位，能驱动基因转录出__________，最终获得所需的__________。 ②终止子：也是一段有特殊结构的__________，位于基因的__________。 ③标记基因的作用：是为了鉴定受体细胞中是否含有目的基因，从而将含有目的基因的细胞筛选出来。 三、将目的基因导入受体细胞 (1)转化： 进入受体细胞内，并且在受体细胞内 和 的过程。 (2)常用的转化方法 ①将目的基因导入植物细胞：采用最多的方法是_______，其次还有__________和__________等。 ②将目的基因导入动物细胞：最常用的方法是________。此方法的受体细胞多是________。 ③将目的基因导入微生物细胞：原核生物作为受体细胞的原因是______ __________，最常用的原核细胞是__________________。其转化方法是： 处理细胞→ 细胞→表达载体与感受态细胞混合→ ___ 细胞吸收DNA分子。 (3)重组细胞导入受体细胞后，筛选含有基因表达运载体的受体细胞的依据是__________是否表达。 四、目的基因的检测与鉴定 (1)首先要检测转基因生物的染色体DNA上是否插入了目的基因，方法是采用__________。 (2)其次还要检测目的基因是否转录出了mRNA，方法是采用________________________。 (3)最后检测目的基因是否翻译成蛋白质，方法是从转基因生物中提取蛋白质，用相应的抗体进行_________。 (4)有时还需进行______________的鉴定。如转基因抗虫植物是否出现抗虫性状。 【导学过程】 知识探究1：目的基因的获取 【思考1】阅读书本P10“生物技术资料卡”，思考如何构建基因组文库和cDNA文库？ 【讨论】观察多媒体动画，绘制具体的PCR技术扩增目的基因示意图 【比较】PCR技术与生物体内DNA复制 DNA复制 PCR技术 不同点 解旋方式 场所 酶 温度条件 合成的对象 相同点 模板 原料 引物 【思考2】结合DNA分子结构的知识，分析PCR技术中DNA解链温度（90℃~95℃）高低取决于什么？ 【思考3】：人工合成目的基因的过程 知识探究2：基因表达载体的构建 【思考4】重组质粒与质粒的主要区别是什么？ 【思考5】终止子和终止密码子的区别？ 知识探究3：将目的基因导入受体细胞 【思考6】农杆菌中的T—DNA（可转移DNA）能整合到受体细胞的染色体DNA中，利用的原理是什么？ 【巩固练习】 1．下列对基因工程的叙述，正确的是 A．基因工程必须使用的工具酶是限制酶、DNA连接酶和RNA聚合酶 B．基因工程的核心步骤是将目的基因导入受体细胞 C．运载体上的标记基因可用于检测目的基因是否导入受体细胞 D．目的基因是否表达可通过DNA分子杂交技术来检测 2．下列有关基因工程的叙述中，错误的是 A