DNA的粗提取及鉴定ppt.pptx

DNA的粗提取与鉴定DNA溶解度00.14NaCI溶液浓度（mol/L）一、实验原理①、DNA在不同浓度的NaCl溶液中的溶解度不同，在0.14 mol/L的NaCl溶液中的溶解度最低。利用这一原理，可以使溶解在氯化钠溶液中的DNA析出。②、DNA不溶于酒精溶液，但是细胞中的某些物质则可以溶于酒精溶液。利用这一原理，可以进一步提取出杂质较少的DNA。③、DNA遇二苯胺（沸水浴）会变成蓝色。因此，二苯胺可以作为鉴定DNA的试剂。二、目的要求初步掌握DNA粗提取和鉴定方法，观察提取出来的DNA物质。三、材料：鸡血细胞液（5-10ml），体积分数为95%的酒精溶液（冷却），蒸馏水，质量浓度为0.1g/ml的柠檬酸钠溶液，物质的量浓度分别为2mol/l和0.015mol/l的氯化钠溶液，二苯胺试剂沉淀四、方法步骤：1、制备鸡血细胞液 取质量浓度为0.1g/ml的柠檬酸钠溶液（抗凝剂）100ml，置于烧杯中，将新鲜鸡血180ml注入，同时用玻璃棒搅拌，以免凝血，然后倒入离心管中用1000r/min的离心机离心2min，此时，血细胞沉淀于离心管的底部，除去上清液，就可以得到鸡血细胞液。加入浓度为0.1g/ml的柠檬酸钠溶液（抗凝剂）：防止鸡血细胞液凝固。问：提取鸡血中的DNA时，为什么要除去血液中的上清液？答：上清液是血清，不含有血细胞，而DNA存在于鸡血细胞中，所以要把上清液除去。 新鲜鸡血鸡血细胞液过滤获得含核物质滤液2、提取鸡血细胞的细胞核物质 将制备好的鸡血细胞液5-10ml，注入烧杯中，加入蒸馏水20ml，同时用玻璃棒沿一个方向快速搅拌，使血细胞的细胞膜和核膜加速破裂，过滤，取其滤液。加入蒸馏水20ml。目的是：使细胞吸水涨破，释放出细胞中的DNA。鸡血细胞液取含核物质滤液3、溶解细胞核内的DNA 将物质的量浓度为2mol/l的氯化钠溶液40ml加入到滤液中，搅拌使其混合均匀，这时DNA在溶液中呈溶解状态。加入浓度为2mol/L的氯化钠溶液40mlDNA溶解液过滤4、析出含DNA的黏稠物 沿烧杯内壁缓缓加入蒸馏水，同时轻轻搅拌，这时会有丝状物出现，随着蒸馏水的加入逐渐增多，一直到氯化钠浓度约为0.14mol/l时，不再继续增加。5、滤取含DNA 的黏稠物加入蒸馏水。目的是：降低NaCI的浓度，析出DNA。获得DNA的黏稠物(白色乳状)过滤6、将DNA的黏稠物再溶解 在烧杯中注入物质的量浓度为2mol/l的氯化钠溶液20ml，使黏稠物尽量多溶解于溶液中。7、过滤含有DNA的氯化钠用纱布过滤，取其滤液，DNA溶于滤液中加入浓度为2mol/l的氯化钠溶液20ml获得含DNA的滤液析出含DNA8、进一步提取含杂质较少的DNA 在溶液中加入冷却的酒精溶液50ml，溶液中出现杂质较少的丝状物（它的主要成分就是DNA）。杂质较少的丝状物加入冷却的酒精溶液50ml含DNA的滤液+二苯胺DNA沸水浴9、DNA的鉴定 取两支20?mL的试管，各加入浓度为0.015?mol／L的氯化钠溶液5?mL，将丝状物放入其中一支试管中，用玻璃棒搅拌，使丝状物溶解。然后，向两支试管中各加入4mL的二苯胺试剂。混合均匀后，将试管置于沸水中加热?5?min，待试管冷却后，观察并且比较两支试管中溶液颜色的变化。 加入0.015氯化钠溶液5?mL加入0.015氯化钠溶液5?mL加入丝状物不加入丝状物加入4mL的二苯胺试剂加入4mL的二苯胺试剂蓝色讨论：问1：2和4过程中都有加入蒸馏水，两次加入的作用一 样吗？为什么？两次加入蒸馏水的作用不一样。第一次加入蒸馏水：使细胞吸水涨破，释放出细胞中的DNA。第二次加入蒸馏水是：降低NaCI的浓度，析出DNA。问2：如果用植物组织作材料来提取DNA，还能用蒸馏 水将细胞涨破释放DNA吗？为什么？不能。因为植物细胞有细胞壁，吸水后不能涨破。问3：能用猪血来提取DNA吗？不能。因为DNA主要存在于细胞核中，血液中的血细胞主要是红细胞，而哺乳动物血液中的红细胞是没有细胞核的，因此，不能用猪血来提取DNA。例：下图为“DNA的粗提取与鉴定”的实验装置，请回答问题。(1)实验材料选用鸡血细胞液，而不用鸡全血，主要原因是鸡血细胞液中 含量较高。(2)在图A所示的实验步骤中加蒸馏水20 mL的目的是 ，通过图B所示的步骤取得滤液，再在滤液中加入2 mol/L的NaCl溶液的目的是 ；图C所示实验步骤中加蒸馏水的目的是 。(3)为鉴定实验所得丝状物的主要成分是DNA，可按图D所示进行实验，滴加 溶液。DNA使血细胞吸水涨破，放出DNA使滤液中的DNA溶于浓盐溶液使DNA析出二苯胺(4)a试管为对照组，b试管为实验组。①a试管现象 ；b试管现象 。②在沸水中加热的目的是 ，同时说明DNA对高温有较强的 。③a试管在实验中的作用是 。④b试管中溶液