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Real Time PCR解析方法 3 Real Time PCR解析方法 1. 标准曲线分析 2. 融解曲线分析 3. 绝对定量和相对定量解析方法 实时荧光定量PCR介绍 * * 融解曲线分析 Tm值是指双链DNA分子解链一半时的温度。 SYBR Green I 法进行检出时， 要根据融解曲线确认PCR产物的特异性。 实时荧光定量PCR介绍 * * 特异性产物 非特异产物 引物二聚体 对PCR产物特异性进行分析 融解曲线分析 实时荧光定量PCR介绍 * * 3 Real Time PCR解析方法 1. 标准曲线分析 2. 融解曲线分析 3. 绝对定量和相对定量解析方法 Real Time PCR解析方法 实时荧光定量PCR介绍 * * 绝对定量解析方法 提取样品 引物设计 标准品制备 Real Time PCR反应 数据分析 流 程 实时荧光定量PCR介绍 * * 绝对定量解析方法 通过制作标准曲线来确定样品的初始模板拷贝数或浓度。通常应用于病毒、细菌、衣原体、支原体的定量检测及转基因食品的检测。 105 104 103 101 扩增曲线图 标准曲线图 检测样品 检测样品 102 实时荧光定量PCR介绍 * * 相对定量解析方法 以上条件不可能同时得到满足，必须用内对照基因（管家基因）校正， 进行相对表达量分析。