02C DNA的复制讲义.pptVIP

第二章 染色体与DNA 遗传物质的分子结构和性质 基因组和染色体 DNA的复制 DNA损伤与修复 重组和转座 DNA的复制 第一节 半保留复制的验证 半保留模型 (semioconservetive model) 全保留复制模型 (conservetive model) 分散模型 (Dispersive model)。 半保留复制的验证实验 一、Meselson-Stahl实验 (1958) 半保留复制 冈崎实验中的假象 E.coli dUTPase，它能使dUTP变成dUMP，dUMP是不能作为DNA合成的底物，这样它就不再能加入DNA中。 尿嘧啶N-糖苷酶（uracil N-glycosylase），它可以切断混合尿苷的糖苷键，形成无Pu和Py位点（apurinic or apyrimidinic ，AP），再由AP内切酶在AP位点切出一个缺口，进一步进行切除修复。 在dut-突变体（dUTPase缺失）中冈崎片段比在dut+中为短。这是因为U掺入机会增加； 在ung-（尿嘧啶N-糖苷酶缺失）突变体中，新合成的DNA约有一半由片段组成。 因为尿嘧啶N-糖苷酶缺失，不会切除U的糖苷链，也就不会出现AP位点，所以碱沉淀时不易断裂，从而保持了半不连续的原貌。 在dut-, ung-双突变体中，结果和实验（2）相同，更进一步证实了此推测。 二、如何打开超螺旋？ 引物 RNA作为引物(primer) RNA引物的大小 原核生物:通常为50～100个核苷酸 真核生物:约为10个核苷酸 RNA引物的顺序 与其模板DNA的碱基顺序相配对 四、复制起始点、复制子、复制方向 DNA在复制时，需在特定的位点起始，这是一些具有特 定核苷酸排列顺序的片段，即复制起始点。 细菌的OriC结构特点： 串联重复序列(tandem repeat): A-T 回文结构(palindrome) E. coli oriC 复制起始区的结构特点是： 富含A－T，这可能和双链易于解开起始复制有关； 含有多个回文结构（9－14个GATC）8个GATC较保守,GATC中的“ A”已甲基化; 具有 4个反向重复顺序，作为蛋白结合位点； 此顺序的右侧毗邻区域有两个起动子，其可能的作用是： ①转录产生引物； ②产生复制必要的蛋白； ③产生调节功能的RNA； ④起转录激活作用。 细菌(或质粒)复制原点的什么特征保证了它在每一循环只起始复制一次呢？ 是起始发生了一些改变，且这些改变在复制原点作标记，所以已复制的复制原点与未复制的复制原点能够加以区别吗？ 用于这一目的的一些序列包含在复制原点。 OriC 包含11个拷贝的 它是甲基化的靶序列，在腺嘌呤的N6位置被Dam甲基化酶所甲基化。 四、参与DNA复制的物质 3、DNA聚合酶 (DDDP) 以dNTP为前体催化合成DNA 需要模板和引物的存在 不能起始合成新的DNA链 催化dNTP加到生长中的DNA链的3‘-OH末端 催化DNA合成的方向是5→3 DNA聚合酶的校对功能 5→3外切酶活性 （3）、真核细胞的DNA聚合酶 五种 DNA聚合酶α DNA聚合酶δ和PCNA DNA聚合酶γ DNA聚合酶β、ε 参与随从链的合成 参与前导链的合成 参与线粒体DNA的合成 参与DNA的修复 DNA的复制 DNA复制中所需的酶和蛋白 DNA解旋酶是一类解开氢键的酶，由水解ATP来供给能量。它们常常依赖于单链的存在，并能识别复制叉的单链结构 又称为双螺旋去稳定蛋白（helix destabilizing protein）。 当解旋酶将双链打开以后，单链DNA具有一种潜在的恢复原来双链的能力，重新形成氢键。 而且单链本身若有反向重复也会形成发夹结构. 这两种情况都会影响复制，但SSB可以解决这一问题。 DNA拓扑异构酶是可以切断DNA链又能重新连接DNA的一种酶。可分为两类： I型拓扑异构酶 II型拓扑异构酶 DNA聚合酶不能从头合成DNA的一条链，所以需要一个引发反应来提供3`端羟基。 这一反应是由引发酶所提供的。 引发酶具有RNA聚合酶活性，在E.coli中是dna G基因的产物。 是DNA复制的主角。 在E.coli中有三种： DNA Pol I；II；III 起主导作用的是DNA Pol Ⅲ 大部分的DNA聚合酶仅能合成一段较小的片段后即会与模板脱离。 但前导链需要连续复制，这就需要一个机制保证DNA聚合酶能长时间与模板结合，提供这一功能的即为滑动夹钳。 在DNA复制的起始过程中引入的小片段RNA是如何去除的？ RNAseH可以特异性的降解与D