化学生物学导论-第三章 核酸4-5节.pptVIP

核酶（Ribozyme） 核酶的发现 核酶的催化性质 核酶的研究中的两个问题 核酶的发现 Altman发现RNase-P的蛋白部分不具催化功能，而RNA部分在有足够浓度Mg2+离子存在下，能起核酸水解酶的作用。 Cech发现RNA原生动物四膜虫的Pre-rRNA是一种具有自催化性能的核酶。 证明了核酸既是信息分子，又是功能分子 核 酶 催化性DNA (DNAzyme) 人工合成的寡聚脱氧核苷酸片段，也能序列特异性降解RNA。 催化性RNA (ribozyme) 　序列特异性的核酸内切酶 　参与RNA转录后加工修饰 　作为针对病毒或肿瘤基因的药物降解mRNA。 核酶的催化性质 RNA作用于RNA 核酸酶催化的反应主要包括:水解反应(RNA限制性内切酶活性)，连接反应(聚合酶活性)和转核苷酰反应等。 最近核酸酶的其他作用底物也已被发现，如多糖、DNA以及氨基酸酯等。 核酶的催化过程图 转酯作用 转酯作用 核酸酶是指所有可以水解核酸的酶 依据底物不同分类 DNA酶(deoxyribonuclease, DNase) RNA酶 (ribonuclease, RNase) 依据切割部位不同分类 核酸内切酶： 限制性核酸内切酶 非特异性核酸内切酶 核酸外切酶： 　　5′→3′或3′→5′核酸外切酶。 参与DNA的合成与修复及RNA合成后的剪接等重要基因复制和基因表达过程 负责清除多余的、结构和功能异常的核酸，同时也可以清除侵入细胞的外源性核酸 在消化液中降解食物中的核酸以利吸收 体外重组DNA技术中的重要工具酶 生物体内的核酸酶负责催化细胞内外核酸的降解 核酸酶的功能 The crystal structure of the L1 ligase ribozyme. (Credit: M. Robertson and W. Scott (Science, March 16, 2007) “谁先出现的呢，核酸还是蛋白质？”这个问题先前被看作是一个极难处理的矛盾，但随着核酶的发现，现在可以想象一个生命起源以前的‘RNA世界’，那里自我复制的酶执行两种功能。 《科学》杂志期刊 X射线衍射技术确定核酶晶体结构 The Structural Basis of Ribozyme-Catalyzed RNA Assembly Michael P. Robertson and William G. ScottScience 16 March 2007: 1549-1553. A SYNTHETIC RIBOZYME CATALYZES THE BOND FORMATION NECESSARY FOR RNA SYNTHESIS BY TRANSITION-STATE STABILIZATION AND ACID-BASE CATALYSIS, PERHAPS AS IN AN EARLY RNA WORLD. Abstract ?|?? Full Text ?|?? PDF ?|?? Supporting Online Material ?|?? 核酶催化效率太低 由于核酶本身是RNA，很容易被核酸水解酶(RNase)所破坏 因此，要将核酶应用于体内阻断基因表达或作为抗病毒的临床药物，还要做大量的研究工作。 核酶的研究中的两个问题 * Long Reads in the curve format. 1260 base read by John Gardner at CEPRAP, Davis, CA 第三章核酸 Nucleic Acid 王骊丽 DNA碱基顺序的测定 RNA碱基顺序的测定 第四节 核酸碱基序列顺序分析(Sequence analysis of nucleic acids) DNA 碱基顺序测定的基本步骤 DNA 片断的制备 DNA碱基顺序测定 DNA 片断的制备 由于DNA的分子量很大，需要先将DNA分子切割或能够用于测定的小片段，共包括部分： ◆ DNA分子酶解：将相对分子量质量大的片断用限制性内切酶技术完成，使切割成能够用于测定的小片段（300-500bp)； ◆ PCR技术扩增DNA片段：DNA片段数量少的情况下，以获取一定数量用于序列测定。 返回 杂交测序法 质谱法 单分子测序法 原子探针显微镜测序法 DNA 芯片法 化学降解法 (Maxam-Gillbert法,1977) 双脱氧链终止法 (sanger法,1977) 新技术方法 核酸序列分析 Nucleic Acid Sequence Analysis 经典方法 一、以化学裂解反应为基础—化学降解法 基本原理：基于有机化学方法，选择性地切断核苷酸（A、G、C或T）所形成的磷酸