急性肝损伤研究.doc

急性肝损伤动物模型研究进展 目前，国内外对肝损伤的防治仍是一个严峻课题。选择合适的肝损伤模型是做好防治肝损伤研究的前提。通过建立实验性肝损伤动物模型，研究肝病的发生机制，筛选保肝药物，探索保肝作用原理，具有十分重要的现实意义。本综述将目前应用较多的模型做一列举分析。 一、化学性肝损伤 1. 四氯化碳肝损伤 CCl4是一种常用的诱发化学性肝损伤模型的剧毒类化学药物之一，因其接触后发病率高。易在动物实验中复制，能准确反映肝细胞的形态学变化，在研究保肝降酶药的实验中经常使用[1]。 CCl4引起肝损害的主要机制是CCl4经肝微粒体细胞色素 P450(Cyt1 P450)活化后生成三氯甲基自由基(·CC13) ，在其启动的过氧化连锁反应中，生毒性作用更强的二氯甲基自由基(·CC12)及过氧化甲基自由基(·OOCC13) ,这些自由基攻击肝细胞膜的多不饱和脂肪酸 (polyunsaturated fatty acid ,PUFA) 引发脂质过氧化[2]。 CCl4溶于植物油，配制0.1 %-0.2%浓度，按10 ml/kg小鼠腹腔注射，或灌胃 0.1 %～0.2 %，或皮下注射0.5 %，12～24 h 内处死动物。测定血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶 (AST)等反应肝功能的指标；肝匀浆超氧化物歧化酶 (SOD)，脂质过氧化物(LPD)或丙二醛(MDA)等反映脂质过氧化的指标，肝脏取同一部位进行组织病理学检查。 此模型是肝损伤的经典模型，应用最多，能准确反映肝细胞的功能、代谢及形态学变化，重复性好。但缺点是 CCl4 还同时损害动物的其他多种脏器，此外，CCl4 挥发性较大，可经人体多种途径吸收，故对实验人员具有一定的中毒危险性。 2. D-半乳糖胺肝损伤 D-半乳糖胺（D-GalN），又名D-氨基半乳糖，是一种肝细胞磷酸尿嘧啶核苷干扰剂，可造成肝弥漫性坏死和炎症，与临床病毒性肝炎的肝脏病理变化相似。 D-氨基半乳糖 (D-galactosamine, GalN)通过消耗肝脏尿嘧啶三磷酸核苷酸，抑制肝细胞RNA合成。GalN 与微量细菌脂多糖 ( lipopolysaccharide, LPS)共处理后，小鼠对LPS敏感性明显增强，引起小鼠急性肝脏损伤，伴有严重肝脏充血和坏死，甚至出现死亡[3]。另外 D-GalN 还可以引起肝细胞内Ca2+增多，Mg2+ 减少，Mg2+/Ca2+ 的比例失调[4]，这可能是D-GalN 导致肝细胞不可逆损害的因素之一。 用无菌生理盐水配制成100 g/L的D-氨基半乳糖溶液，并用1 mol/L NaOH调节其pH 值至7.0。大鼠或小鼠腹腔注射600-900 mg/kg和LPS 10μg/kg，造成急性肝损伤模型，染毒24-48 h 内处死动物，检查肝功能、脂质过氧化指标及组织病理学。 该模型肝脏组织病理学改变和生物化学的变化均与人类病毒性肝炎极为相似，也能发展为肝性脑病，其可逆性和重复性均较好[4]。而且D-GalN 肝毒性的专一性较其他肝毒物较好，对实验人员也无危险。因此，D-GalN 性肝损伤模型是目前公认的比较好的研究病毒性肝炎的发病机制及有效治疗药物的实验动物模型。 3. 对乙酰氨基酚肝损伤 对乙酰氨基酚亦名醋氨酚、扑热息痛 (acetaminophen ,paracetamol ,APAPAP)， 是替代阿司匹林的解热镇痛药，大剂量或长期服用时，可导致严重毒性效应，尤以肝脏小叶中央型坏死为常见。AP造成的肝损伤是目前国际上常用的模型。 AP致肝损伤机理主要是其代谢过程中产生 N-乙酰-对苯醌亚氨(NAPQI)，耗竭肝细胞还原型谷胱甘肽，降低肝细胞抗氧化能力，继而使肝细胞产生氧化应激性损伤。NAPQI 还可以与生物大分子共价结合，导致蛋白质巯基被氧化和芳基化而影响它们的功能。此外，对 AP 在肝内代谢过程中产生自由基可引起肝细胞膜脂质过氧化，并通过破坏钙稳态而产生细胞毒性。虽然在AP 诱导的肝损伤模型中氧化损伤是导致肝细胞亚显微结构破坏而引起肝细胞坏死是肝损伤的主要原因，但细胞凋亡也参与肝损伤过程[5]。 加热下溶于生理盐水，给小鼠300500 mg/kg 一次性腹腔注射[6]，也可配成质量浓度为2.5 %的混悬液经口灌胃，制成急性肝损伤模型，染毒24 h 后处死动物，眼眶取血，检查肝功、病理及脂质过氧化等有关指标。 王宪龄[7]等通过该模型比较柴胡和黄芩不同剂量比例配伍对小鼠肝损伤的保护作用。模型组灌胃给予扑热息痛混悬液(500 mg/ kg ,1 %CMC - Na 配成2. 5 %的混悬液) 20 ml/kg24 h 后脱颈椎处死小鼠测定各种指标。结果显示模型组的ALT、AST含量均较空白组有明显升高，血清和肝匀浆中GSH明显下降。 AP为临床常用的解热镇痛药每日25 mg 治疗