组织切片染色技术课程.pptVIP

例如，细胞核（尤其是核内的染色质）主要由核酸组成，是酸性的组成成分，故和碱性染色剂(苏木精)的亲和力很强，易于着色。细胞质含碱性物质，故和酸性染色剂(伊红)的亲和力很大，易于着色。 8．要将组织四周的污染物去掉 9．封固剂要适量 10．染好的切片标签贴牢，编号清楚，避光保存 二、苏木素-伊红染色液的配制 2.埃利希（Ehrlich），苏木素染液 配制 ①无水乙醇 100ml ②甘油 100ml ③苏木精 2g ④钾明矾 2g∽3g ⑤醋酸 5ml∽10ml置于阳光下自然氧化3个月左右成熟。其优点是： 染色结果甚佳，贮存愈久染色愈强，而且不需分色。 二、苏木素-伊红染色液的配制 （二）分化液 1％盐酸酒精，是最常用的分化液。 配方：70％酒精 99ml 浓盐酸 1ml 二、苏木素-伊红染色液的配制 （三）还原液 1．氢氧化氨液： 配方：浓氨水 1ml 蒸馏水 99ml 2．饱和碳酸锂液： 配制：碳酸锂 1g 蒸馏水（冷） 78ml 3．流水冲洗还原。 二、苏木素-伊红染色液的配制 （四）伊红染液 配方：伊红Y（水溶） 0.5g∽lg 蒸馏水 99ml 若取用伊红Y（醇溶性）应溶于99ml 75％或95％的乙醇中。 若在伊红液中加入0.5毫升冰醋酸，可加速其染色过程，并使胞质的色泽更为艳丽。 三、染色方法 苏木精 伊 红 嗜碱性结构： 细胞核 粗面内质网 游离核糖体等 嗜酸性结构： 细胞质基质 溶酶体、线粒体等细胞器 胶原纤维等 常规脱蜡 苏木素染色（5-15min），水洗 盐酸乙醇溶液分化（30s），水洗 伊红染色（1-3min），水洗 氨水反蓝（30s），水洗 90%乙醇（5min） 80%乙醇（30s） 100%乙醇（2次×10min） 二甲苯（3次×5min） 封片 染色 脱水 透明 封片 脱蜡 染色的时间，应根据室温，及组织的具体情况来确定，做之前做预实验。 在染色后，重新进入酒精和二甲苯，最后用中性树胶封片，以便长期保存。 * 切片: 固定→梯度酒精上行→二甲苯→石蜡。 * 染色: 石蜡→二甲苯→梯度酒精下行→水。 * 保存: 水→梯度酒精→二甲苯→中性树胶。 * 苏木素是碱性染料，蓝紫色，可以使细胞核等着色。被苏木素着色的结构本身为酸性，具有嗜碱性。 * 伊红是酸性染料，粉红色。可以将大多数细胞的细胞质染成红色。被伊红着色的结构本身为碱性，具有嗜酸性。 * 不易被苏木素和伊红着色的结构具有嗜中性。 石蜡切片HE染色 * * 组织切片染色技术 学习目标 掌握：染色、常规染色的概念；HE染色的基本步骤。 熟悉：染色的目的、原理；常用染色术语；染色前后的处理；苏木素-伊红染色液的配制。 了解：染色的注意事项。 染色概述 第一节 一、染色的概念 就是利用染料在组织切片上给予颜色，使其与组织或细胞内的某种成分发生作用，经过透明后通过光谱吸收和折射，使其各种微细结构能显现不同颜色，这样在显微镜下就可显示出组织细胞的各种成分。 染色是制片过程中的一个重要环节 二、染色的目的 将染料配制成溶液 将组织切片浸入染色剂内 经一定的时间，组织或细胞及其他异常的成分被染上不同深浅的颜色 对光产生不同的折射率 便于在光镜下观察。 染色的物理作用 (1）毛细管作用及渗透作用 染色剂与组织细胞没有牢固的结合 (2)吸收作用：又称溶解学说。 组织吸收染色剂，牢固的结合。 组织的着色与溶液的颜色相同。 三、染色原理 (3)吸附作用 是固体物质的特性，即较大的物体能从周围溶液(染液)中吸附一些小颗粒(化合物或离子)到自身的特性。 细胞中各种蛋白质或胶体有不同的吸附面，因此能选择性地吸收不同的离子，即某种蛋白质对某种染色剂有吸附作用,而对别种染色剂无吸附作用，这就可以解释鉴别染色现象。 三、染色原理 染色的化学作用 染色剂按性质可分为酸性、碱性和中性染色剂，而动、植物的细胞内一般也可区分为酸性(阴离子)和碱性(阳离子)部分。 当碱性染色剂溶液中的有色部分成为阳离子时，就能与细胞的阴离子(酸件部分