实验二细菌普通染色和革兰氏染色.docx

细菌普通染色和革兰氏染色生05 边晔 2010030026周四 5-1同组：徐竞实验时间 2012年10月18日实验目的掌握细菌涂片标本的制备方法和普通染色的步骤掌握革兰氏染色法的步骤和关键点识别细菌的革兰氏染色结果学习无菌操作技术 实验原理革兰染色法由丹麦病理学家Christain Gram于1884年创立，是细菌学中很重要的鉴别染色法，因为通过此法染色，可将细菌鉴别为革兰阳性菌（G+）和革兰阴性菌（G-）两大类。近年来由于对细菌细胞壁的结构有了较深入的了解，对革兰染色的机制提出不同的看法。一般认为革兰阳性细菌的肽聚糖层较厚，经乙醇处理后使之发生脱水作用而使孔径缩小，结晶紫与碘的复合物保留在细胞内而不被脱色；而革兰阴性细菌的肽聚糖层很薄，脂肪含量高，经乙醇处理后部份细胞壁可能被溶解并改变其组织状态，细胞壁孔径大，不能阻止溶剂透入，因而将结晶紫与碘的复合物洗去而被脱色。虽然如此，革兰染色的差异并不能完全认为是化学的差别，也有物理结构不同的结果，因为酵母菌细胞壁的成份完全和细菌不同，但具有革兰染色阳性反应。实验器材载玻片，盖玻片，接种环，酒精灯，显微镜、擦镜纸、镜油、擦镜液；结晶紫、革氏碘染液、95%酒精、番红染液；枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和未知菌的18小时的液体培养液，酵母菌、平板，大肠杆菌平板，牙垢。实验步骤涂片左手持菌液EP管，右手持接种环，在火上对接种环灭菌后，从EP管中取一环培养液，于载玻片中央涂成薄层（事先在背面做好标记圆圈），将接种环在火焰上烧灼灭菌。若是从平板上取材，则事先在载玻片上滴一小滴水，在火焰附近把平板打开一小口，用接种环调取菌落边缘的物质涂于水滴上。室温下自然干燥。固定手持或镊子夹载玻片一端，标本面朝上，在灯的火焰外侧快速来回移动3~4次，共约3~4秒。要求玻片温度不超过60℃，以玻片背面触及手背皮肤不觉过烫为宜，放置待冷后染色。初染滴加1滴草酸铵结晶紫染液，染色1分钟，水洗，吸干。媒染用碘液冲去残留水，再加1滴碘液覆盖涂片1分钟，水洗，吸干。脱色用吸水纸吸去玻片上的残留水，滴加95%的乙醇脱色，轻轻摇动玻片，倒掉脱色液，直至流出的乙醇无紫色时，立即水洗，吸干。脱色时间20~30秒。复染滴加1滴蕃红染液复染1-3分钟以上，水洗。镜检照相吸干载玻片背面及标本周围水渍,滴上半滴水，盖上盖玻片,油镜镜检；看到合适的结果后拿着标本到4楼实验室显微摄影。实验结果与讨论 实验结果图与讨论分析酵母图1. 酵母，放大倍数10X100=1000倍。菌体个体巨大，卵圆形。革兰氏染色结果呈紫色。染色结果符合理论，为革兰氏阳性菌。实际观察到的颜色近乎黑色。酵母个体大，且形态特征明显，实验较容易成功。金黄色葡萄球菌图2. 金黄色葡萄球菌，放大倍数10X100=1000倍。菌体个体小，球状，成团存在。革兰氏染色结果呈紫色。染色结果符合理论，为革兰氏阳性菌。但由于菌体个体小，不易观察。枯草芽孢杆菌图3. 枯草芽孢杆菌，放大倍数10X100=1000倍。菌体个体较大，呈杆状。革兰氏染色结果呈紫色。染色结果符合理论，为革兰氏阳性菌，但菌体最终的染色结果偏向红紫色。由于个体较大，非常容易观察未至菌S1图4. 未知菌S1，放大倍数10X100=1000倍。菌体个体较大，呈棒状。革兰氏染色呈紫色。染色结果显示未知菌为革兰氏阳性菌。通过与其他组同学的交流，可以基本肯定此为革兰氏阳性菌。大肠杆菌图5. 大肠杆菌显微图，放大倍数10X100=1000倍。菌体个体小，短棒状，分散存在。革兰氏染色结果呈红色。染色结果不是很明显的红色，为革兰氏阴性菌。同组同学染了三次大肠杆菌，说明要把大肠杆菌染出好的结果不太容易。且大肠杆菌个体很小，更不易观察。未知菌S3图6. 未知菌S3，放大倍数10X100=1000倍。菌体个体较小，呈球状。革兰氏染色呈红色。实际上从实验结果只能肯定不是阳性菌，但红色并不明显。由此看出革兰氏阴性菌染色不容易得出非常好的结果。牙垢 图7. 牙垢，放大倍数10X100=1000倍。菌体繁多，大部分染色后呈现红色，个体较小，形态为短棒状，少部分染色后呈现紫色，以大团块形式存在。牙垢中菌种多样，一部分为革兰氏阳性，一部分为革兰氏阴性。取牙垢前漱一下口。列表简述染色结果菌种菌体形状特征染色后颜色革兰氏染色结果酵母菌体个体巨大，卵圆形。紫色阳性金黄色葡萄球菌菌体个体小，球状，成团存在。紫色阳性枯草芽孢杆菌菌体个体较大，呈杆状。紫色阳性未知菌S1菌体个体较大，呈棒状。紫色阳性大肠杆菌菌体个体小，短棒状，分散存在红色阴性未至菌S2菌体个体小，球状，分散存在红色阴性牙垢菌体繁多，大部分染色后呈现红色，个体较小，形态为短棒状，一部分染色后呈现紫色，以大团块形式存在。紫色、红色阳性、阴性影响微生物革兰氏染色结果的因素菌龄：染色所用的细菌最好