临床免疫学和免疫检验.pptVIP

　第一节 概述 B与F分离 Ab* Ab* Ag + Ag + Ab* Ab Ab 第二节　免疫金标记技术 第三节　膜载体免疫测定的种类与原理 快速检测（渗滤法）原理图  哪些斑点是抗原特异性 T 细胞产生的（此斑点具有进一步分析价值），哪些是无关细胞产生的（此斑点没有 T 细胞研究价值） 斑点大小的意义 在对不同细胞因子计数和分析时，如何定义斑点最大和最小尺寸 如何从单个细胞基础上分析 实验精确度有多高？如果一个细胞产生相似的细胞因子，在多大程度上会干扰分析结果？ 几次重复实验才能使结果更有意义？ Elispot结果判断 方法学评价 颜色逐渐加深 操作结束颜色不变 阳性反应颜色浓度 3~20 min 3 min 观察时间 1 3~5 操作步骤 室温一年 4~8℃ 6个月 试剂保存 试剂条 渗滤装置及附加试剂 试剂形式 ICA IFA IFA与ICA的比较 滥用药物 心肌标志 肿瘤标志 妊娠、排卵的诊断 感染性疾病的诊断 不易制备定量、半定量试剂 可测定物范围广（主要为定性试验） 稳定性较差（普通试剂） 保存期长（优质试剂） 精密度较差，质控困难 单份测定 敏感度略低，价格略高（与ELISA比） 简便，快速 不足之处 优点 膜固相免疫测定的特点 阳性 阴性 固相膜 固相抗原 待测抗体 金标记抗人IgG抗体 人IgG 固相抗人IgG抗体 GIFA技术的发展（间接法测抗体） 2点（测试+控制） 金标试剂：单人份、液体 样品： 血清、血浆、全血、 尿液 INSTANTCHEK HIV 1+2 第八代 单一试剂 研制中 第九~十二代 改进抗原HIV 1+2，提高敏感度和特异性，缩短反应时间，减少步骤，样品多样化 。 单点， 5~10分钟， 血清， 金标试剂瓶装冻干品 HIVCHEK（DuPont） 第一代 1988 GIFA技术的发展 1990年 ABBOTT公司 胶体硒标记ICA Unipath公司 CLEARVIEW 立明衣原体 彩色胶乳标记ICA ROCHE Cardiac Reader TnT 定量 0.1~3 ng/ml 合成TnT质控点 ICA技术的发展 ICA 甲胎蛋白（AFP） 参考值：30 μg/L 肝癌诊断值：400 μg/L 结果判定： （-） 30 （+） 30~200 （++） 200~400 （+++） 400 μg/L IFA 微量白蛋白 单孔法 T：测定孔 C1：定量质控 30 mg/L C2：定量质控 200 mg/L 结果判定： （-） 30 （+） 30~100、 （++） 100~200 （+++） 200 mg/L IFA 肌红蛋白 双孔法 S：测定孔 C：定量质控 100μg/L S C 测 定 线 对 照 线 T C2 C1 半定量测定 Dot-ELISA 细胞受到刺激后局部产生细胞因子，此细胞因子被特异单克隆抗体捕获。细胞分解后， 被捕获的细胞因子与生物素标记的二抗结合，其后再与碱性磷酸酶标记的亲和素结合。 BCIP/NBT 底物孵育后， PVDF 孔板出现“紫色”的斑点表明细胞产生了细胞因子，通过 CTL 公司生产的 ELISPOT 酶联斑点分析系统对斑点的分析后得出结果。 ELISPOT 检测原理 ELISPOT 分析仪解决以下问题 Elispot  第十二章　固相膜免疫测定 放射免疫测定 　 1960’ 酶免疫测定 　　 1970’ 荧光免疫测定 1980’－1990’ 化学发光免疫测定 1990’－ 膜固相免疫测定 1990’－ 标记免疫测定 免疫浊度测定 Ag + Ab AgAb + Ab 标记免疫测定 Ag + Ab* Ag Ab* + Ab* （B） （F） 免疫测定分类 利用抗原抗体反应检测标本中微量物质 　抗原+抗体 抗原抗体复合物 Ag +Ab 　Ag * Ab 免疫测定原理 固相免疫测定 多孔性