生物工程专业英语第三章翻译3.6-3.7.docVIP

3.6 分析和操纵遗传物质已革命性的发展在体外基因的克隆技术，允许隔离，净化和选择性扩增在适当的生物系统几乎任何离散段从几乎任何生物体。由于删除基因不含相关基因，基因的克隆可以采用的方法分析和处理是主要针对基因区域的利益，从而大大提高效率的方法，简化了识别和表征（特征分析）的新型改性衍生物。相反，原生质体融合，大部分或全部基因组混合的特点和兴趣控制一般由大量的基因（例如，抗生素），基因重组技术主要关注的是少数个别基因的已知基因的产品（例如，保护蛋白质，多肽等。）。 该l978遗传操作规定（基因操作条例）定义的遗传操纵的形成新的组合的遗传物质的分离的核酸分子，通过任何手段以外的细胞，任何病毒，细菌质粒，或其他载体系统，使其纳入（掺入）宿主生物体中，他们不自然地出现在他们能够继续繁殖的遗传操纵。因此定义不包括，例如，单克隆抗体，改良微生物常规遗传技术，体外受精或克隆技术用于动物使用。遗传操作技术，到目前为止，只有一小的贡献，虽然重要的，生物技术的研究和应用。 在过去十年中几个重要的发现是在介于分子生物学的迅速发展引发了基因重组技术。特别意义的孤立的突变株大肠杆菌不能分解或限制外源基因导入细胞，并确定和表征限制性内切酶能够切割双链（德尚）基因在特定的网站。一般来说，这样的片段无法改造或复制有效地在宿主细胞。这一问题已在很大程度上克服了插入片段为载体，可以插入到宿主细胞，使有关信息表达的载体。通常是细菌质粒，噬菌体或酵母2μDNA，共价粘接的片段的载体，是实现与酶核酸连接酶。新合成的载体或嵌合分子进行改造宿主生物，如大肠杆菌，枯草芽孢杆菌、酿酒酵母和宿主细胞生长和繁殖（克隆）也将载体复制和扩增基因。它可以克隆整个基因组，从而创造一个大规模的收集或图书馆（库）独立分子（基因组文库基因组文库。）将包含所有的生物基因组序列，原则上应是可能的孤立任何基因提供一个具体的探针检测可以得到。如果平均大小的克隆序列20个碱基，约700000个人克隆将需要一个完整的图书的人类基因组。 遗传操作技术提供了革命性的能力，因为它们是快速，普遍适用的，允许一个高度控制在操作过程中，首先产生形成新的基因组合，之前从未被选定的实验室方法。基因重组技术已成为发展最快的方面的生物科学。 中央对这一新技术的概念是克隆已确定由蒂米斯（1981）的分离和个体传播的一个单一的元素能够繁殖的混合物相似的元素。在实践中，克隆一直被用来传播纯培养的病毒，微生物和植物的营养方式从而保证精确的生物体的基因组（表3.2。）。如今，该词还包括分离和维护个人自治遗传因素如质粒和潜隐病毒的基因组。克隆细胞有机体只需要营养介质；克隆的病毒和质粒将涉及一个特定的宿主细胞结合营养培养基，而克隆的基因将需要载体的复制，一个特定的宿主细胞和营养培养基。所有类型的克隆具有重要的作用，生物技术；因此所有的微生物，植物和动物细胞可用于生物技术的进程需要保持和传播在纯和恒定状态，而病毒和质粒传播或放大，特别是，已确定为功能强大的工具，在新的生物技术。 原则的基因克隆或基因重组技术将简要讨论使用的主要例子的大肠杆菌K - 12质粒载体系统。虽然基因克隆技术的使用病毒载体在不同的细节，参与的原则是相似的。 基本要求体外转染和表达外源基因在宿主细胞中概述图3.6和图3.7和可归纳如下： 孤立的质粒脱氧核糖核酸分子，必须包含一个网站，整合外源基因不会破坏基本功能。 （2）新一代的基因片段，克隆的方式适用于限制性内切酶。可插入一个染色体片段从另一个微生物（原核生物或真核生物），从动物或植物，或从化学合成的脱氧核糖核酸序列。 （3）拼接的方法，外源基因的载体。 （4）纳入混合基因重组进入宿主细胞。 （5）表达的转化（转化子），重组质粒。 因此，一个主要特点，这种新的遗传技术，它允许相当大的控制权的片段被克隆和可以使用基本的任何片段从任何生物体。 质粒。基本的这一新技术的质粒。质粒可以稳定遗传的基本分子没有被链接到染色体。它们是重要的医药和农业因为他们赋予抗生素耐药性的病原体的人和动物，可以规范毒素和其他蛋白可能增加毒力的这种病原体。他们也很重要，因为有些可能参与固氮根瘤菌属。而其他人可以代码为范围广泛的代谢活动，使某些细菌降解化合物可能成为环境污染物，质粒分子双链脱氧核糖核酸存在的共价闭合环状分子（中心）的宿主细胞。分子量质粒的范围从1×106至200×106。接合质粒可以自我复制到另一个从一个细菌可以通过件染色体细菌插入序列和转座子。也可以携带质粒。质粒可以用来作为载体，克隆基因。 质粒携带耐药基因被称为电阻（R）质粒和一定的大肠杆菌耐药质粒已被用来作为载体。一个最最常用的质粒克隆大肠杆菌基因是pBR322赋予抗氨苄青霉素和四环素。质粒脱氧核糖核酸可以被孤立的溶藻细菌细胞分离质粒染色体脱氧核糖核酸在氯化铯梯度含有