染色体标本的制备及组型观察实验报告.docVIP

细胞生物学实验报告 染色体标本的制备及组型观察 实验目的：掌握染色体标本制作的基本方法；认识不同生物的染色体的状态，学会做染色体组型图。 实验用品： 仪器及器材：显微镜、载玻片、盖玻片、镊子、手术剪、解剖盘、胶头滴管、离心管、离心机、小烧杯、冰箱、酒精灯、小烧杯 实验药品：蒸馏水、0.9% NaCl溶液、0.3% KCl溶液，固定液（甲醇：冰醋酸=3:1）、秋水仙素 实验材料：小鼠 实验原理： 制作染色体标本的意义：了解染色体的特征（形态、大小、数目）——绘制染色体组型图 染色体组型：把真核动物一个体细胞各染色体按长度、形状、着丝粒位置排列成一定顺序。 染色体核型：某一物种特有的一组或一套染色体的形态特征。 染色体组型图的应用 鉴别生物种类：兔44条；小鼠40条；大鼠42条；鸡78条；猫38条；狗78条；马64条 遗传病的诊断和研究：三体综合征（含三条21号染色体）、卵巢退化症（含45条染色体，比正常人缺少一条性染色体）、睾丸退化症（含47条染色体，比正常人多一条X或Y染色体）等 因此，我们可以给孕妇抽取羊水检查器胎儿的染色体，做遗传病早期诊断。 染色体标本的制作 观察：由于分裂期中期的染色体染色体凝集程度最高，因而我们应尽量使细胞停留在分裂期中期以便观察。 细胞：为尽量看到多的染色体，我们应当选取具有旺盛分裂能力的细胞，这样的细胞可以来自:胸腺、骨髓、睾丸、小肠等。我们在此实验中使用的是小鼠的精巢细胞。在做人的染色体标本时，我们使用的是血液里的淋巴细胞。 药物： PHA（植物细胞凝集素）：PHA具有促进细胞凝集和分裂的作用。PHA可以使血液中的淋巴细胞还原至淋巴母细胞（只存在于骨髓中） 秋水仙素：秋水仙素可以破坏微管的组装，纺锤体不能形成，细胞分裂停在中期。与秋水仙素作用相同的药物还有长春花碱、鬼臼素、苯环己烯等。可以促进胃管组装的药物有紫杉酚、重水等。 空气干燥：使细胞与染色体易于分离 低渗作用：水进入细胞内，细胞内容空间变大，染色体距离变大，易于分离、展平。 固定：Camoy’s solution,使组蛋白变性（变硬），维持染色体原有形态 描述染色体的四个参数 相对长度=（每条染色体的长度）/（单倍常染色体之和+X染色体）*100 相对长度可以用来表示每条染色体的长度 臂指数=（长臂的长度）/(短臂的长度) 臂指数可以用来确定臂的长度 为了更准确的区别亚中部和亚端部着丝粒染色体1964年Levan提出划分标准：臂指数在1.0-1.7之间，为中部着丝粒染色体（M）；1.7-3.0之间，为亚中部着丝粒染色体（SM）；3.0-7.0之间，为亚端部着丝粒染色体（ST）；7.0以上，为端部着丝粒染色体（T） 着丝粒指数=（断臂长度）/（染色体全长）*100 着丝粒指数可以决定着丝粒的相对位置 按Levan的划分标准，着丝粒指数在50.0-37.5之间，为M；37.5-25.0之间，为SM；25.0-12.5之间，为ST；12.5-0.0之间，为T 染色体臂数（NF），根据着丝粒的位置来确定 端着丝粒染色体（T），NF=1 中部，亚中部，亚端部着丝粒染色体（M,SM,ST）,NF=2 视野中染色体可能是20或40条左右，因为细胞可能处于减数第一次分裂和减数第二期分裂时期。 实验步骤： 取雄性小鼠，以每克体重4微克注射秋水仙素（约1mL），14-16h后，用断头法处死小鼠，取出睾丸用生理盐水（0.9% NaCl溶液）洗去血污，置于解剖盘中。 将睾丸放入装有1mL 0.3% KCl溶液的小烧杯中剪碎（液体呈乳白色）。 用铜网过滤到刻度离心管中，再加0.3% KCl溶液至4mL。 37℃静置30mins，低渗处理。 以800-1000r/min离心8分钟。 弃上清液，加入2mL甲醇·冰醋酸固定液。用吸管吹气，轻轻打散细胞，固定8mins。 再以800-1000r/min离心8分钟。 弃上清液，加入1mL甲醇·冰醋酸固定液制成细胞悬液，固定5mins。 取去洁净的低温预冷载片，距10-15cm的高度滴下2-3滴细胞悬液，从一边轻轻吹气，并随时轻轻敲打，以使细胞均匀分布和促使染色体展开。 用滤纸擦去载片上的多余液体，空气干燥或文火干燥，染色30-35mins。 实验结果：视野中可见细胞分裂期中期细胞，呈棒状，有个别染色体被展开呈V字形，视野中也可见大量精子，处于分裂期但不是分裂中期的细胞。 10*40显微镜下观察： 普通细胞 普通细胞中，中期染色体40条 精子精子中，中期染色体20条 分析与讨论 结果分析： 本实验采用的是小鼠的精巢，所以视野中可见大量的精子，它们有一个比较圆的头部和鞭毛，有部分细胞在进行减数第一次分裂的中期，这样的细胞是二倍体，可观察到40条染色体，有些在进行减数第二次分裂中期，这样的细胞是单倍体，应有20条染色体。还有