药品微生物限度检查方法验证步骤及示教.docVIP

药品微生物限度检查方法验证一般步骤 1.样品及确定验证项目 样品要求：不含菌或少量菌 验证项目：根据药品用药途径、处方、制法确定。细菌、霉菌及酵母菌计数验证（一般必作）；控制菌检查如为中药制剂必须查标准，根据用药途径、处方、制法确定控制菌检查项目。特殊的如滴眼剂、用于烧伤、严重创伤等应根据制剂通则项下要求及微生物限度标准来确定。 2. 确定供试液制备方法 3. 方法选择预试验 （1）目的：确定样品对试验菌有无抑菌活性及计数验证各试验菌的回收试验方法。 （2）查资料，根据样品的功能、主治及所含成分等确定方法选择预试验方案。 （3）根据预试验结果确定各试验菌计数验证方法 控制菌验证方法 4. 验证试验：选择3个批号样品进行3次独立实验，证明方法的有效性； 5. 据验证结果优化试验条件，建立微生物限度检查方法SOP。 6. 写出验证资料。 示教内容 11.5.上午： ( 代) 批 号 回收率% 1ml 0.5 ml 0.2 ml 0.1 ml 大肠埃希菌（4）（1：10）65 81 81 91 金黄色葡萄球菌（4）（1：10） 0 35 89 94 枯草芽孢杆菌（4）（1：10） 0 43 83 93 白色念珠菌（4）（1：10） 86 90 / 黑曲霉 （4）（1：10） 91 90 结果： 大肠埃希菌0.5ml以下/皿（1ml分注2个皿以上）回收均达到70%以上； 枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌0.2ml以下/皿（1ml分注5个皿以上）回收均达到70%以上。白色念珠菌、黑曲霉按平皿法回收均达到70%以上。 计数方法验证：平皿稀释法： 大肠0.5ml/皿；金葡、枯草0.2ml/皿。白念、黑曲霉1ml/皿。 （每个大组作1个批号样品计数方法验证、控制菌大肠埃希菌检查方法验证） 试验前准备：各试验菌液（100-200cfu/ml）、1：10供试液、平皿、吸管等、BL增菌液 试验组 菌液组（各2皿）、 供试品对照组 　　　　↓　　　　　　　　　　　↓　　　　　　　　　　↓ 0.5ml+大0.5ml（4皿） 大0.5ml 细0.2ml（6-10皿） 0.2ml+金0.5ml（6皿） 金0.5ml 0.2ml+枯0.5ml（6皿） 枯0.5ml 1ml +白0.5ml（2皿） 白0.5ml 霉 1ml （2皿） 1ml +黑0.5ml（2皿） 黑0.5ml （ 共44皿，按规定培养、计数） （注：若所验证的计数方法成立，供试品对照组采用10个皿就同时完成该批号样品细菌计数测定） 2.大肠埃希菌检查方法验证 试验组 阴性菌对照组 供试品对照组 ↓　　　　　　　　↓　　　　　　　　　↓ BL 100ml BL 100ml BL 100ml 10ml 1：10供试液 10ml 1：10供试液 10ml 1：10供试液 +大肠10-100cfu +金葡10-100cfu 阴性对照：BL 100ml+稀释剂10ml 操作要点：1.2.同方法选择预试验 3. 正式验证各试验菌验证方法采用预试验结果中回收率在70%以上的方法进行，最终以敏感菌方法确定计数方法；也可采用各菌的回收率均在70%以上的方法进行。 11.7上午 离心沉淀集菌法、薄膜过滤法（反复使用集菌器）示教 两种方法可应用于有抑菌活性的样品，或与其他方法的联用。 离心500r/min3-5分钟取上清液 + 平皿稀释法（细菌）、沉降+平皿稀释法（霉菌、酵母菌），离心沉淀集菌法（3000r/min20分钟）+平皿稀释法、离心500r/min3-5分钟上清液+薄膜过滤法（主要用于细菌计数验证）。 离心机、刻度离心管（10ml、成对平衡）、吸头、2ml刻度吸管 离心500r/min3-5分钟、离心沉淀集菌法（3000r/min20分钟）的操作方法： 500r/min3-5分钟（用于细菌检测）：取上清液的方法及要求（上清液不应少于8ml，否则供试液应适当稀释）； 3000r/min20分钟弃去上清方法及要求（留管底约2ml，当离心沉淀物超过2ml时供试液应适当稀释）。 薄膜过滤法（反复使用集菌器）操作方法： 1. 滤膜（不大于0.45um）的选择及准备： 水溶性供试液→水性膜：滤膜用水浸泡15分钟后装膜，121