核酸的理化性质及杂交.doc

第四节 核酸的理化性质一、酸性化合物???⑴?两性\但酸性强。????电泳行为--泳向正极（pH7-8）。????沉淀行为--加盐（中和电荷） M+与磷酸-中和；乙醇。 ??高分子性质粘度 DNARNA????⑵超离心沉降???凝胶过滤?二、UV吸收最大吸收峰在260nm附近???? 第五节 核酸的变性、复性与杂交?一、?DNA的变性 ⒈ 定义：核酸在理化因素作用下，双螺旋结构。根据变性因素区分为碱变性、热变性等。如DNA的碱变性、DNA的热变性，其中DNA的热变性更具典型意义。 ????粘度改变，钢性线性分子变得无序，粘度下降，UV吸收增强，其规律如下色效应核酸变性后、氢键破坏，双螺旋结构破坏，碱基暴露，紫外吸收（260nm）增强，高色效应。?⑵?解链温度\融解温度（Tm）UV吸收增值达到最大吸收增值50%时的温度称Tm。Tm与 DNA G+C含量有关，G+C含量愈大Tm愈高，反之则反；与核酸分子长度有关，分子愈长，Tm愈高。Tm值的计算公式：（（课本P25） ?说明：DNA变性时只改变其空间结构，不改变它的核苷酸序列。? 二、DNA的复性 ⒈ 定义：（课本P25） 述：DNA发生热变性后，经缓慢降温，如放置室温逐渐冷却，解开的互补链之间对应的碱基对再形成氢键，恢复完整的双螺旋结构，称DNA热变性的复性。??减色效应：?核酸复性时UV下降，此称低色效应。???DNA加热变性后，若经骤然降温，互补链碱基之间来不及配对互补，形成氢键联系，两链维持分离状态。Tm约低25°的温度 ???? 三、分子杂交 ⒈ 定义：（课本P25－26） 述：当不同来源的核酸变性后一起复性时，只要这些核酸分子中含有相同序列的片段，可形成碱基配对，出现复性现象形成杂种核酸分子，称杂化双链核酸分子杂交。