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两种分光光度法对天然抗氧化物质抗羟自由基性能的测定 闫有禄 （云南省红河学院理学院化学系2001级化学教育化教AB班蒙自661100） 摘要：为了检测Fenton试剂（H2O2/Fe2+体系）产生的羟自由基（.OH），本文采用了亚甲基蓝和邻二氮菲—Fe2+两种分光光度法对六种天然的野生植物抗氧化剂对羟自由基的作用进行了分析和检测。两种分光光度法对羟自由基的分析检测及抗氧化剂的抗羟自由基性能检测方法，对研究工作都具有很好的实用性。从茶叶、黄草、甘草、葛根、姜、枇杷籽中提取的抗氧化物质与羟自由基清除率具有明显的量效关系，具有很好的抗氧化能力及羟自由基清除作用，方法稳定性好，操作简便，测定快速，能简便的筛选抗羟自由基的清除率和有效抗氧化剂药物的方法。 关键词：羟自由基、羟自由基检测、分光光度法、自由基清除率、抗氧化作用、抗氧化剂。 引言： 羟自由基是体内最活泼的活性氧，是一种氧化能力很强的自由基，是目前所知活性氧中对生物体毒性最强、危害最大的一种自由基，可导致许多病理变化，它可以通过电子转移、夺取氢原子（加成）和羟基化（脱氢）等反应方式与生物体内的多种分子作用，在生物体内，需氧代谢的氧化还原反应所产生的羟自由基，可以引发不饱和脂肪酸发生脂质过氧化反应，并损伤膜结构及功能，使糖类、氨基酸、蛋白质、核酸和脂类等都发生氧化，使物质的氧化性遭受损伤和破坏，造成细胞坏死或突变。同时羟自由基还与衰老、肿瘤、辐射损伤和细胞吞噬等有关，羟自由基的检测对于自由基的生物作用研究有重要意义。羟自由基清除率是反映药物抗氧化作用的重要指标，因此，加强对羟自由基作用的研究是很有必要的。产生羟自由基的方法除经典Fenton反应外，还有Cu+—H2O2、Co2+—H2O2体系也能产生羟自由基，只是它们的最大吸收波长不同。目前分析检测羟自由基的方法有电子自旋共振法、化学发光法、脉冲辐解法、细胞色素C氧化法、无机荧光法、高效液相色谱法、薄层扫描法等。采用这些方法时所需仪器特殊，试剂昂贵，因而使其应用受到限制。本文采用两种不同的分光光度法进行羟自由基的产生及物质的抗氧化性能进行分析、检测和研究。天然物质抗氧化作用的研究及抗氧化剂的开发目的就是为了清除自由基，使生物体能够健康生长和发展。此两种分光光度法由于所需设备简单、仪器通用、操作简便、快速，便于广泛应用。 实验部分六种天然植物中抗氧化物质的提取： 1.1实验部分 1.1.1仪器和试剂 a.仪器：蒸馏装置、回流装置、过滤装置、恒温水箱及其它的辅助实验仪器装置。 b.试剂：95%的乙醇溶液、10%的乙醇溶液、0.5%的稀氨水和蒸馏水。 1.2实验方法： 1.2.1茶叶的提取：用95%的乙醇一次回流提取，称取茶叶末100g，用500ml乙醇（95%）于1、实验部分90±1℃下回流提取1小时，趁热过滤，将所得滤液蒸馏为深褐色液体置于棕色试剂瓶中备用。 1.2.2甘草的提取：称取甘草切片100g加入回流连续提取器中，分别加入含0.5%稀氨水和含10%乙醇溶液600ml，在1、实验部分50—55℃条件下连续提取4小时，最后将提取液过滤，用蒸馏装置将滤液蒸馏浓缩至棕色液体置于棕色试剂瓶中备用。 1.2.3葛根的提取：称取葛根粉末340g，用95%的乙醇600ml在回流提取器中，连续提取两次（每次1小时），趁热过滤，将滤液用蒸馏装置蒸馏浓缩至棕色液体置于棕色瓶中备用。 1.2.4黄草的提取：称取黄草200g，每次用95%的乙醇600ml在回流连续提取器中连续提取两次（每次1小时），趁热过滤，将滤液用蒸馏装置蒸馏浓缩至棕褐色液体置于棕色试剂瓶中备用。 1.2.5姜的提取：称取姜粉末60g，用95%的乙醇400ml在回流提取器中连续提取两次每次1小时，趁热过滤，将滤液用蒸馏装置蒸馏浓缩至黄色液体置于棕色试剂瓶中备用。 1.2.6枇杷籽的提取：称取枇杷籽100g，用95%的乙醇800ml在回流提取器中连续提取两次每次1小时，趁热过滤，将滤液用蒸馏装置蒸馏浓缩至黄色液体置于棕色试剂瓶中备用。 亚甲基蓝分光光度法检测Fenton试剂产生的羟自由基。 自由基和抗氧化剂的研究，最主要的工作就是建立活性氧或自由基的发生体系，然后过检测其中产生的自由基和抗氧化剂或自由基清除剂对所产生自由基的抑制清除行为。Fenton反应能够产生羟自由基，产生的羟自由基与亚甲基蓝发生反应后，亚甲基蓝的颜色发生变化，亚甲基蓝具有特殊的深蓝色，利用其褪色效应，可以采用分光光度法对其进行研究。利用分光光度计测定其在617nm波长处的吸光度值A，可以计算其△A617值，可以间接测定羟自由基的产生量。在未产生羟自由基前加入抗氧化剂或自由基清除剂可以清除一部分羟自由基或抑制产生的羟自由基的行为，采用分光光度计测定其在617nm波长处的吸光度值A，可以间接测定羟自由基的清除率