固相萃取同时提取尿中39种药毒物张玉荣1，梁晨2，金琦芸2，郭幼梅2.docVIP

固相萃取同时提取尿中39种药毒物 张玉荣1，梁晨2，金琦芸2，郭幼梅2（上海刑事科学技术研究所，上海200083；复旦大学药学院药物分析教研室，上海 200032） 摘要目的尿中药毒物高效液相色谱分析。方法以多沙普仑为内标，1mL尿样经Oasis小柱固相萃取后，用HPLC进行分析，药毒物内源性物质不干扰测定。结果39种药毒物的绝对回收率除吗啡外均大于70%；精密度小于10%；检测限1~ ng·mL-1；线性相关系数在0.9977以上。结论本法可用于药毒物。 关键词固相萃取高效液相色谱法尿 固相萃取作为从生物样品中提取净化微量药物或其代谢物的方法，已被广泛地应用于生物样品的检测中，其中尤以与HPLC技术结合用于生物样品的分析引人注目。在实际工作中，由于案例情况各有不同，分析人员即使怀疑是相同的目标物也可能采用不同的方法（包括检材的处理、仪器条件、数据处理等）。同一案例，不同分析者采用不同的方法，不同仪器，可能会产生不同的结果，也就是说在方法与方法之间很难进行比较，而对于不同的目标物或目标物完全未知的案例所采用的方法更是千变万化，这样就有产生错检、漏检的可能。因此，药毒物分析工作者一直在试图寻找一个既实用又通用的药毒物的系统筛选方法，可在不同实验室、分析者、仪器之间进行比较。 目前已报道的文献大多只涉及到几种或某一类药毒物本文希望通过扩大药物的覆盖面，建立一种可快速、同时测定多种药毒物的切实可行的并具有通用性的方法，以实际检案的需要 材料和方法 1.1 仪器 HP1100系列高效液相色谱仪（G1315光电二级管阵列测器）；HACH sension1型pH测定仪。 1.2 39种对照品：普鲁卡因（procaine）、哌唑嗪（prazosin）、苯妥因钠（phenytoin sodium）、导眠能（glutethimide）、戊巴比妥（pentobarbital）、氟硝西泮（flunitrazepam）、安眠酮（methaqualone）、三唑仑（triazolam）、吗啡（morphine）、克仑特罗（clenbuterol）、O6-单乙酰吗啡（O6-monoacetylmorphine）、可待因（codeine）、O3-单乙酰吗啡（O3-monoacetylmorphine）、福尔可定（pholcodine）、氯硝西泮（clonazepam）、艾司唑仑（estazolam）、阿普唑仑（alprazolam）、替马西泮（temazepam）、地西泮（diazepam）、氯喹（chloroquine）、马钱子碱（brucine）、美沙酮（methadone）、氟西泮（flurazepam）、多虑平（doxepin）、奋乃静（perphenazine）、氟奋乃静（fluphenazine）、异丙嗪（promethazine）、氯丙嗪（chlorpromazine）、氯普噻吨（chlorprothixene）、三氟拉嗪（trifluoperazine）、罂粟碱（papaverine）、蒂巴因（thebaine）、那可汀（narcotine）、苯海拉明（diphenhydramine）、氯氮平（clozapine）、布比卡因（bupivacaine）、丙咪嗪（imipramine）、阿米替林（amitriptyline）、泰尔登（tarden）及内标多沙普仑（doxapram）均由中国药品生物制品检定所提供；对照品和内标均配成浓度为1mg·mL-1的甲醇液将对照品液分组混合并用甲醇稀释成液二氯甲烷、三乙胺、氨水均为分析纯，正己烷为光学纯，甲醇为色谱纯三乙胺100mL加水1200mL混合，用冰醋酸调节pH到8.0，最后加水至1500mL，三乙胺缓冲液Oasis固相萃取小柱（HLB 1cc/30mg）购自Waters公司。 1mL 甲醇1mL水1.0mL尿样上样后依次用1mL 2%氨水5%甲醇的水，1mL 5%甲醇的水清洗，然后将固相萃取小柱离心甩干（3 000r/m，3min），最后用1mL 二氯甲烷洗脱。洗脱液加入内标储备液3μL后在50℃ 水浴中空气流下吹干，残渣用50μL 甲醇溶解，取10μL进样。 1.3.2 色谱条件采用LiChrospher? 100 RP- （250mm×4.0mm，5μm）色谱柱；二极管阵列检测器，检测波长为230nm和250nm，同时进行紫外扫描；柱温50℃；流动相A 甲醇：水：三乙胺缓冲液=50：46：4，流速0.80m·min-1；流动相B 甲醇：水：三乙胺缓冲液=75：：，流速0.60 m·min-1。在选定的条件下，药物色谱峰都得到了良好的分离空白，见图1 A流动相 B流动相 图1. 空白尿样在两个流动相条件下的色谱图 线性关系 以药物峰面积与内标峰面积之比（Y）对样品中药物浓度