分子诊断学1231.pptx

分子诊断学夏 小 春 1999年11月，美国研究病理学会和分子病理学协会创刊出版《The Journal of Molecular Diagnostics》杂志，标志着基因诊断技术已经发展成为一个成熟的学科——分子诊断学。What ？Why ？What ？1.分子诊断学定义方法、手段 分子诊断学是以分子生物学理论为基础，利用分子生物学的技术和方法研究人体内源性或外源性生物大分子和大分子体系的存在、结构或表达调控的变化，为疾病的预防、预测、诊断、治疗和转归提供信息和决策依据。对象内容目的分子诊断=基因诊断≠？基因诊断分子诊断学包括：核酸诊断（DNA、RNA)、蛋白质检测诊断 2.分子诊断学研究范畴★利用分子生物学与其他相关学科的理论和方法，探讨疾病发生发展的分子机制★确定疾病过程中的特异分子诊断指标★建立分子诊断指标的临床实用检测方法★建立分子诊断的质量控制 3.实验室技术发展◆ 第一代 细胞学检查◆ 第二代 生化指标检查◆ 第三代 免疫学诊断◆ 第四代 分子诊断表型检查病因检查有预测性Why？发展简史 应用 1.分子诊断学的发展简史分子生物学的发展简史：分三个阶段：1.确定了蛋白质是生命的基础。2.确定了DNA是生物遗传的物质基础酝酿阶段建立阶段发展阶段1.发现mRNA、DNA聚合酶、RNA聚合酶。2.提出了DNA半保留复制机制、操纵子学说等重大理论。3.发现遗传密码并证明其有通用性。中心法则建立。1.重组DNA技术的建立和发展2.基因组研究的发展。3.单克隆抗体及基因工程抗体的建立和发展。4.基因表达调控机制。5.细胞信号转导机制的研究。分子诊断学的发展史就是分子生物学技术发展史。分子诊断学的发展简史追溯：1978年,Kan首次成功的将分子杂交技术用于镰状细胞贫血的产前基因诊断。分子诊断的技术史:● 第一阶段 代表技术：分子杂交技术● 第二阶段 代表技术：常规的PCR技术（1985年）● 第三阶段 代表技术：生物芯片技术Southern 杂交技术Northern 杂交技术斑点杂交原位杂交分子杂交技术常规PCR步骤：1.变性：双链DNA模板在热作用下，氢键断裂，形成单链DNA2.退火：系统温度降低，引物与DNA模板结婚，形成局部双链3.延伸：在Taq酶的作用下，以dNTP为原料，合成与模板互补的DNA链每一循环经过变性、退火和延伸，DNA含量增加一倍。基因芯片生物芯片蛋白芯片缩微芯片2.分子诊断学在医学中的应用●遗传病的基因诊断●感染病的基因诊断●肿瘤的基因检测其他：(多基因疾病的易感性检测、疗效监控、卫生防疫等。) 3.展望未来最有希望改善世界各国，特别是发展中国家健康状况的十大生物技术：★第一位：传染病的分子诊断技术★第二位：利用基因工程技术开发重组疫苗技术★第五位：病原体基因组测序技术未来分子诊断三个重要发展方向1.胚胎着床前诊断-早期产前诊断即在囊胚8个细胞时期对细胞进行染色体核型分析和原位杂交，从而将人类的遗传缺陷控制在最早期阶段。2. 母体外周血中的胎儿细胞的分子诊断—非损伤性产前诊断用母体外周血中胎儿细胞取代羊膜穿刺或采集绒毛进行无创性产前诊断方法。3.多基因疾病的分子诊断如：心血管系统疾病、神经精神系统疾病、恶性肿瘤、糖尿病、哮喘等进行分子诊断。 4.绪论小结※ 1. 分子生物学概念※ 2.分子诊断学概念和研究内容※ 3.分子诊断学的发展简史-分子诊断技术发展简史（分子杂交、PCR、生物芯片等）※ 4.分子诊断学的应用（感染性疾病、单基因遗传病、肿瘤、耐药基因、多基因疾病易感性） 5.复习题※ 1.什么是分子生物学？※ 2.什么是分子诊断学？目前分子诊断可用于哪些疾病？※ 3.简述分子诊断学的发展趋势。谢 谢 ！ 分子生物学 分子生物学是从分子水平研究生物大分子（核酸、蛋白质）的结构与功能从而阐明生命现象本质的学科。肿瘤相关基因● 原癌基因Ras、myc、src 等● 抑癌基因P53、APC、PTEN等 目前癌症基因检测主要技术是/subview/1020950/1020950.htm实时荧光定量PCR(RT-PCR)，它具有准确率高、特异性强、灵敏度高、操作简单、应用范围广、高通量等特点。研究人员指出，基因诊断方法可以检查APOE蛋白质（一种载脂蛋白，对修复大脑神经元有重要作用）是否变异，这种APOE发生变异的人，患阿尔茨海默病的风险就会增加。对于APOE变异的人，应该再使用磁共振检查其大脑顶叶的活动情况。如果大脑顶叶活动减弱，则这样的人在随后两三年内很有可能会出现记忆力衰退。老年痴呆可以通过基因诊断进行早期预测（与之相关的遗传位点至少有4个：APP、S182和STM-2基因和APOE基因）目前的分子诊断主要是基因诊断