猪链球菌研究进展.docVIP

猪链球菌主要毒力因子研究 摘要：猪链球菌（Streptococcus suis type）是一种重要的人畜共患病病原，在世界范围内广泛流行，可以引起猪或人的败血症、脑膜炎、心内膜炎、关节炎等。其中，毒力因子在致病过程中扮演着重要的作用，本文就近年来有关猪链球菌毒力因子的研究进展作一综述。 关键词：猪链球菌；毒力因子；人畜共患病 猪链球菌是链球菌的一种，可引起人兽共患传染病。该菌按荚膜多糖抗原共分为35个血清型，猪链球菌2型（Streptococcus suis type 2，SS2SS2主要毒力因子的研究进展作一综述。 1 SS2的毒力因子 目前研究发现的SS2毒力因子主要有溶菌酶释放蛋白（Muramidase released protein，MRPExtracellular protein factor，EFCapsularpolysaccharide，CPSSuilysin），以及近年来相继发现的纤维素结合蛋白、DNase、IgG结合蛋白、Sao蛋白、谷氨酸脱氢酶、毒力岛、38 kd蛋白、44 kd蛋白、54kd蛋白、78 kd蛋白、86kd蛋白等1。 1.1溶菌酶释放蛋白（MRP） 目前对MRP的研究比较深入，致病性较高的SS2基本上都有MRP。2000年，何孔旺等2在检测从我国江苏病猪体内分离的菌株时发现，当地的SS2也是MRP+。 MRP通常存在于原生质体或培养基的上清液中，由1208个氨基酸组成，相对分子质量约为136000，MRP能抵抗巨噬细胞的吞噬，并且能黏附上皮细胞。对其基因序列的分析发现，锚定序列前有一高度重复区，其中包括与纤维素结合所需的氨基酸序列，但不与人的纤维素结合。重复区前是一段富含脯氨酸的序列，可能与胞壁肽聚糖的结合有关。细菌的黏附是决定病原菌能否感染的关键一步。除了标准的MRP蛋白外，还有两种与其类似的蛋白MRPs(相对分子质量小于136000)和MRP* (相对分子质量大于136000) 1。研究发现， MRP可黏附上皮细胞，并可诱导上皮细胞凋亡，证实了MRP是SS2的毒力因子，将基因工程蛋白MRP免疫猪，可以获得抵抗SS2感染的保护力3。 1.2胞外蛋白因子（EF） 目前对EF的研究也比较多，高致病性SS2基本上也都有EF，EF通常存在于培养基的上清液中，相对分子质量为110000。在一些不含有EF因子的SS2中，还可能含有另一种蛋白EF*，其可以产生与EF类似的免疫效果1。Smith等4克隆并表达了EF和EF*，结果发现EF和EF*蛋白N-末端的前833个氨基酸几乎完全相同，而C-末端则不同，EF*比EF蛋白多了几个重复的氨基酸，且这种重复序列在不同的EF中有所不同。 不过，MRP和EF并不是保守的毒力因子，即并不是所有的强毒株均带有这两个毒力因子，并且其存在许多亚型。 1.3溶血素（Suilysin） 溶血素是一种分泌性蛋白，作用于红细胞膜上胆固醇而溶解细胞，相对分子质量约为54 000-65000，属硫醇激活的毒素家族，对热敏感1。Norton等5报道，猪链球菌溶血素在猪链球菌黏附和裂解Hep-2细胞的过程中发挥了重要作用，且产生溶血素的SS2活菌和培养上清及纯化的溶血素均能导致人脑微血管内皮单层细胞产生病变，而所产生的病变可被猪链球菌溶血素抗体和胆固醇所抑制。不产溶血素的菌株及其培养上清均不能引起细胞病变。杜华茂等6在这方面通过实验也得出了类似的结论，证明溶血素与猪链球菌2型的毒力有关。 溶血素是一个良好的交叉保护因子，含有纯化溶血素的疫苗可保护小鼠免受感染，也可部分保护猪。不同血清型的菌种所分泌的溶血素的生化特性和免疫特性几乎相同，基因型也无明显差异。国内分离的SS2强毒株几乎均能产生溶血素，且均具有良好的免疫原性。 1.4荚膜多糖（CPS） Elliott等7用Sepharose 6B层析后经乙醇沉淀得到型特异性的荚膜多糖，相对分子质量至少为100000000，由鼠李糖、半乳糖、N-乙酰葡萄糖胺组成，摩尔比为1.07：3.17：1.00。Wibawan等8的研究表明，荚膜的存在降低了SS2被吞噬的程度。Segura等9的研究同样显示，有荚膜的SS2不易被吞噬，而无荚膜的突变株则很容易被吞噬。另外他们还发现，荚膜多糖抵抗吞噬细胞的吞噬作用，是通过抑制其信号传导路径实现的。由此可见，CPS是SS2的一个重要毒力因子，是使其避免被吞噬的主要因子。但CPS在许多非致病菌株中也存在，表明其并非必须的毒力因子。 1.5 IgG结合蛋白 IgG结合蛋白相对分子质量为6000，属于热休克蛋白家族，能结合人和猪的IgG-Fc片段。IgG结合蛋白不仅存在于细胞表面，也存在于细胞培养上清中10。直接在硝酸纤维素膜上培养猪链球菌，再用人IgG作用，即可得到菌体表面的IgG结合蛋白。在酸性环境中