规范的筛查实验室操作与记录摘要.ppt

HIV抗体检测的意义 HIV感染的诊断、疾病进展的监测、抗病毒疗效观察和耐药性监测中至关重要。 HIV检测不同于其它病原微生物检测，要求十分严格，任何错误的诊断，包括假阳性或假阴性，都会对被检者产生十分重要的影响。 试剂评估 第四代HIV诊断试剂是一种HIV-1/HIV-2抗体与HIV-1 O亚群抗体及p24抗原的联合检测方法，增加了p24抗原检测，在对第四代试剂的研究中发现p24抗原滴度降低时，血清阳转过程中S/CO值却并未降低，也没有发现第四代试剂检测阴性而第三代试剂检测为阳性的样本。 第四代试剂由于可同时检测抗原和抗体，因而献血员筛查时，建议用第四代试剂进行检测，以尽量提高输血的安全性。 酶联试验 一 实验前期准备工作 实验操作 实验记录 检测报告 实验前期准备工作 目的：是为临床提供准确可靠的实验诊断依据。 我们为了保证实验数据的可靠性，在检验医学中必须坚持全面质量控制（ TQC total quality control ）. 对影响临床检验结果可靠性的各方面因素及各个环节进行质量控制, 全过程质量控制包括实验前、实验中、和实验后三个阶段的质量控制。在实验误差中实验前误差占70%，因而实验前质量保证对减少实验误差显得尤其重要。 试剂准备 ELISA测定中试剂的准备最为关键的是，在实验开始前，将试剂盒先从冰箱中拿出来在室温下放置30分钟以上后，再进行测定，以使试剂盒在使用前与室温平衡。这样做的目的，主要是为了在后面的温育反应步骤中，能使反应微孔内的温度能较快地达到所要求的高度，以满足测定要求。 在实验时将试剂从冰箱中拿出来即用，而忽略了这种做法有可能影响后面温育时间不够的问题，其直接的后果是对一些弱阳性标本的检测出现假阴性。 样品登记 实验室可根据自己的情况来选择样品登记，样品登记主要使用样品登记本；有条件的实验室使用样品登记软件，不仅可以做样品的记录还可以用来发放检测报告。 HIV抗体检测实验 对于我们常用的ELISA实验大致可以分为以下几个步骤： 1、加样 2、温育 3、加酶标抗体 4、加底物液显色 5、终止反应 6、结果判定 加血清样品的注意事项 移液器的使用 垂直加样 吸头尖端需浸入液面3mm以下 慢吸慢放，控制好弹簧的伸缩速度 放液时吸头尖端靠在容器内壁2/3 移液器的使用 反向吸液： 适用于粘稠液体和易挥发的液体 多吸入的液体可以补偿吸头内部的表面吸附，因此定量实验都采用此方法 移液器的维护和保养 每次实验完毕后可用75%的酒精棉球来擦拭，然后用双蒸水将移液器下半部分拆卸清洗、最后置于紫外线照射下进行表面消毒、晾干以备下次使用。 洗涤 洗涤的方式分为机洗和手洗，现在实验室由于都配备了洗板机已基本取代了手工操作， 机洗采用浸泡式 常用于自动洗涤仪器实验中，浸泡时间约为30-60秒 ，洗板条件按试剂盒说明设定。 洗涤 其次，目前的商品ELISA试剂盒中的洗板液均需在实验室使用时对所提供的浓缩液稀释配制，因此稀释时所用的蒸馏水或去离子水应保证质量，且不可使用污染过的水源或自来水。 洗涤在ELISA过程中虽不是一个反应步骤，但却也决定着实验的成败。ELSIA就是靠洗涤来达到分离游离和结合酶标记物的目的。通过洗涤以清除残留在板孔中没能与固相抗原或抗体结合的物质，以及在反应过程中非特异性地吸附于固相载体的干扰物质。可以说在ELISA操作中，洗涤是最主要的关键技术，应引起操作者的高度重视，操作者应严格按照试剂盒厂家要求来洗涤 温育 温育是ELISA测定中影响测定成败最为关键的一个因素。ELISA作为一种固相的免疫测定，抗原抗体的结合反应在固相上进行，要使液相中的抗原或抗体与固相上的特异抗体或抗原完全结合，必须在一定的温度条件下反应一定的时间。温育所需时间与温度成反比，即温度越高，则所需时间相对较短。 温育 通常目前国内ELISA商品试剂盒的反应温育时间为37℃ 30分钟～1小时，进口ELISA试剂盒则通常为37℃ 1～2小时才能有较完全的结合，低于试剂盒所要求的时间，就可能会影响测定的下限。因此，关于温育，要保证在设定的温度下有足够的反应时间 。 显色 ELISA试剂的显色液在使用前制备，制备好的显色液要在30分钟内使用，并且要避光保存，如果有没用完的显色液切不可重复使用 比色 加入显色剂以后应先用洁净的吸水纸拭干板底附着的液体，然后将板正确放入酶标比色仪的比色架中，比色结果以光密度（oplical density，OD）表达， 临界值（cut off ） 根据试剂盒说明书设定计算公式。 酶标比色仪 酶标比色仪简称酶标仪，通常指专用于测读ELISA结果吸光度的光度计，许多试剂公司配套供应酶标仪。 酶标仪的