色谱分析方法导论.ppt

70%CH3OH +30H2O 60%CH3OH +40H2O 50%CH3OH +50H2O 40%CH3OH +60H2O 溶剂(流动相)组成对色谱分离的影响(梯度淋洗) 1：9,10-蒽醌；2：2-甲基-9,10-蒽醌；3：2-乙基-9,10-蒽醌 4：1,4-二甲基-9,10-蒽醌；5：2-特丁基甲基-9,10-蒽醌； 改变组成使 k 最佳 色谱分离中的问题 由于分析物组成复杂，以某一组成的流动相可能使部分待测物得到好的分离，但同时又使其它待测物的分离不令人满意！实际工作中采用程序升温（GC）和梯度淋洗（LC）来解决这个问题。 三、分析时间 t 分析时间通常指最后一个组分出峰的时间。其值为 可见，分析时间与R，?，k、H/u等参数有关。R 增加1 倍，分析时间则是原来的 4 倍。 实际工作中，即要能获得有效的分离，又要在较短时间内完成分析。 表-1 概念、表示方法及计算公式汇总 表-2 例：两物质A和B在30cm长的色谱柱上的保留时间分别为16.4和17.63min，有一不与固定相作用的物质，其在此柱上的保留时间为1.30 min。物质A和B的峰底宽分别为1.11和1.21min。试问： 1）柱分辨率R； 2）柱平均理论塔板数nav 3）平均塔板高度Hav 4）若要求R达到1.5，则柱长至少应为多少？ 5）使用上述较长的柱进行分析时，其分析时间为多长？ 6）不增加柱长，要求在原来的分析时间内R达到1.5，该柱的塔板高度应为多少？ 1）柱分辨率R； 2）柱平均理论塔板数nav 3）平均塔板高度Hav 4 4）若要求R达到1.5，则柱长至少应为多少？ 5）使用上述较长的柱进行分析时，其分析时间为多长？ 6）不增加柱长，要求在原来的分析时间内R达到1.5，该柱的塔板高度应为多少？ 以上是当塔板数为5时的情况，出现的峰形不对称 ，这是由于塔板数太少的原因。当塔板数大于50时，峰形就是对称的。在实际色谱柱中，n值很大（约为106～ 109 ）。所以色谱峰一般为正态分布。 （二）柱效能指标：对于一个色谱柱来说，其分离能力（叫柱效能）的大小主要与塔板的数目有关，塔板数越多，柱效能越高。 色谱柱的塔板数可以用理论塔板数和有效塔板数来表示。 式中：tR为某组分的保留时间； W1/2为某组分色谱峰的半宽度； W为色谱峰的峰底宽度。 由式可见，柱子的理论塔板数与峰宽和保留时间有关。保留时间越大，峰越窄，理论塔板数就越多。柱效能也就越高。 1．理论塔板数n： 对于一个柱子下说，其理论塔板数可由下式计算： 对于一个柱长固定为L的柱子，其理论塔板高度H为 每一个塔板的高度，即组分在柱内每达成一次分配平衡所需要的柱长叫理论塔板高度。它越小，也表示柱效能越高。 2．有效塔板数n有效： 在以上计算理论塔板数的式子中使用的是保留时间，它包括了死时间，它与组分在柱内的分配无关，因此不能真正反映色谱柱的柱效。为此，引入了有效塔板数的概念。 同理有效塔板高度为： 3.塔板理论的特点： (1)当色谱柱长度一定时，塔板数 n 越大(塔板高度 H 越小)，被测组分在柱内被分配的次数越多，柱效能则越高，所得色谱峰越窄。 (2)不同物质在同一色谱柱上的分配系数不同，用有效塔板数和有效塔板高度作为衡量柱效能的指标时，应指明测定物质。 (3)柱效不能表示被分离组分的实际分离效果，当两组分的分配系数 K 相同时，无论该色谱柱的塔板数多大，都无法分离。 (4)塔板理论无法指出影响柱效的因素及提高柱效的途径。 三．速率理论——范弟姆特方程式： 塔板理论是一个半经验性的理论。它定性的给出了板高的概念，但不能指出影响板高的因素。速率理论就是在塔板理论的基础上，给出了影响塔板高度的因素： u 为流动相线速度； A，B，C为常数，其中 A—分别表示涡流扩散系数； B—分子扩散系数； C—传质阻力系数（包括液相和固相传质阻力系数）。 该式从动力学角度很好地解释了影响板高（柱效）的各种因素！任何减少方程右边三项数值的方法，都可降低H，从而提高柱效。 1）涡流扩散项(A) 在填充柱中，由于受到固定相颗粒的阻碍，组份在迁移过程中随流动相不断改变方向，形成紊乱的“涡流”：从图中可见，因填充物颗粒大小及填充的不均匀性——同一组分运行路线长短不同——流出时间不同——峰形展宽。展宽程度以A表示：A=2?dp 其中dp—填充物平均直径；?—填充不规则因子。 可见，使用细粒的固定相并填充均匀可减小A，提高柱效。对于空心毛细管柱，无涡流扩散，即A=0。 流动方向 2）分子扩散项(B/u)