矿泉水和城市供水中粪性链球菌滤膜法的确证性实验.doc

　　品种名称：脑—心浸萃琼脂培养基 　　英译名称：Brain Heart Infusion Agar 　　品种编号：028361 　　培养基规格：100g干燥培养基 　　培养基用途： 广泛用于霉菌、酵母、细菌的培养，包括营养要求较高的微生物的培养，特别用于矿泉水和城市供水中粪性链球菌滤膜法的确证性实验。　　脑—心浸萃琼脂培养基使用原理： 　　胨和脑—心浸粉提供氮源、维生素和生长因子;葡萄糖可为多种细菌提供能源;氯化钠维持均衡的渗透压;磷酸氢二钠为缓冲剂。 　　脑—心浸萃琼脂培养基配方(每升)： 　　幼牛脑(提取浸出粉)200g 　　牛心(提取浸出粉) 250g 　　葡萄糖2g 　　氯化钠5g 　　月示 胨 10g 　　磷酸氢二钠 2.5g 　　琼脂15g 　　最终pH7.4±0.2 　　脑—心浸萃琼脂培养基使用方法： 　　1. 称取脑—心浸萃琼脂培养基51g，加入1000 mL蒸馏水或去离子水，搅拌加热煮沸至完全溶解，分装试管，121℃灭菌15分钟，做成斜面培养基。 　　2. 从滤膜上挑取典型菌落，接种到脑—心浸萃琼脂培养基斜面上，在35±0.5℃培养24—48 h。 　　3. 挑取典型培养物到一片清洁的载玻上，加几滴新鲜的3%的过氧化氢到载玻片的涂抹菌液上，如果没有气泡发生，就显示过氧化氢酶反应为阴性，则菌落可视为粪链球菌，就应该继续如下确证过程。如果有气泡发生，则过氧化氢酶反应为阳性，因此菌落不属于粪链球菌确证试验至此即可结束。 　　4. 以接种环从脑-心浸萃琼脂培养基上转移一典型菌落到脑-心浸萃液态培养基内，在45℃培养48h。此外也要同时转移一典型菌落到胆汁液态培养中，在35℃培养72h。这种培养基是以无菌的10%牛胆汁加入到60mL无菌的脑-心浸萃液态培养基中面配成。 　　5. 转移到上述培养之后，若是菌落能得到繁殖，则表示结果为阳性。 　　6. 计数结果。 　　菌数/ 100mL = N / V × 100 　　N——经证实的粪性链球菌菌落数 　　V——过滤的水样体积(mL) 　　脑—心浸萃琼脂培养基质量控制： 　　质控菌株接种后于35±0.5℃培养24h，结果如下： 　　菌 名 　　　　　　菌 号　　　　　　生长状况 　　粪性链球菌　　　　CMCC(B)32223　　 良好 　　乙型溶血性链球菌　CMCC(B)32210　　良好 　　大肠埃希氏菌 　　ATCC25922 　　　　良好 　　培养基贮存注意事项：贮存于避光、阴凉干燥处，用后立即旋紧瓶盖。贮存期三年。