硫酸软骨素的提取和纯化的研究进展.doc

硫酸软骨素的提取和纯化的研究进展 栾允光 赤峰学院化学系，赤峰024000 摘要　关键词：硫酸软骨素；提取；纯化 　 硫酸软骨素(Chondroitin sulfate)是一种酸性粘多糖，广泛存在于哺乳动物的软骨、喉骨、鼻骨和气管中。硫酸软骨素是由葡萄糖醛酸和氨基己糖交替连结而成的双糖聚合物，它通常与蛋白质结合成糖蛋白的形式存在，当其水解时发生消去反应，连接硫酸软骨素与蛋白质中丝氨酸羟基的苷键断裂，可以得到游离态的硫酸软骨素。硫酸软骨素为白色或微黄色粉末,具有吸湿性，易溶于水而成粘度较大的溶液，难溶于甲醇、乙醇、乙醚、丙醇、丙酮和冰醋酸等有机溶剂，并且遇热不稳定，乙酰基易发生水解脱落,在酸性条件下更易水解成不同聚合度的低聚糖。硫酸软骨素具有降血脂、抗凝血、抗炎症及抗肿瘤等生理活性，临床上可用于预防动脉粥状硬化、提高机体免疫力、治疗风湿病和肾炎及由链霉素引起的听觉障碍。硫酸软骨素与铜等金属离子结合可用于治疗皮肤病，与硝酸铋或氢氧化铝反应得到的络合物可用于治疗消化性溃疡，与苯甲酸酯、利多卡因或布比卡因作用生成的衍生物可用作麻醉剂。作为食品添加剂，硫酸软骨素可用于食品的乳化、保湿和祛除异味。在化妆品中添加硫酸软骨素，可调节皮肤的细胞代谢，促进营养的吸收，保持皮肤的水分和改善发质。[1,2,3] 1 硫酸软骨素的提取 1.1 中性盐法 先用10%氯化钙提取，氯仿-戊醇（1：4）除去蛋白质，2倍量乙醇沉淀，最后以Lloyd 试剂精制。而以透析法除杂质、氯化六氨合钴纯化，或一磷钨酸纯化，均可使工艺简化。以30%氯化钾或30%氯化钾加1%碳酸钾提取，高岭土吸附除去杂蛋白，可提高产品收率。该方法提取的产品较白，各项指标符合国家标准，也不会造成环境污染，但是产率较低，造成原材料的大量浪费，对经济效益有一定的影响。 1.2 碱提取法 （1）浓碱提取工艺 将粉碎好的软骨碎片称重后，加入骨质量1.5倍的15%氢氧化钠溶液，室温下进行浸提12～16h（分两次进行），然后用盐酸调pH到2.8～3.2，双层纱布过滤30min，留下滤液。 将滤液调节pH 到8.5～9.0，按骨质量的4%加入胰蛋白酶，于50～54℃水解6h，用盐酸调节pH 到6.5，升高温度到80～90℃，加入活性炭进行脱色反应，然后过滤，在滤液中加入1.5 倍体积的无水乙醇进行沉淀分层4h，所得沉淀即为硫酸软骨素，在60℃下干燥即得最终产品，其产率较高。 （2）稀碱提取工艺 将粉碎好的软骨碎片称重后，加入骨质量6倍的2%氢氧化钠溶液，60℃下进行浸提24 h（分两次进行），然后用盐酸调pH 到2.5～3.0，双层纱布过滤，留下滤液。将滤液调节pH 到8.5～9.0，按骨质量的4 %加入胰蛋白酶，于50～54℃水解7 h，用盐酸调节pH 到5～7，升高温度到80～90℃，加入0.5 %活性炭进行脱色反应，然后过滤，在滤液中加入1.5倍体积的无水乙醇和1.5%的氯化钠溶液进行沉淀分层6h 。所得沉淀再次加入1.5%的氯化钠溶液和3倍体积的无水乙醇进行沉淀，所得即为硫酸软骨素，然后在60～65℃下干燥即得最终产品，其产率较高。 （3）稀碱稀盐提取工艺 将粉碎好的软骨碎片称重后，加入均为骨质量6倍的0.5%氢氧化钠和2%的NaCl 混合溶液，室温下进行浸提30h（分两次进行），然后用盐酸调pH 到8.5～9.0，加入骨质量4%的胰蛋白酶进行水解。 水解后升温到80～90℃，加入骨质量1.5%的滑石粉，过滤；加入1.7倍体积的无水乙醇进行沉淀，过滤后再加入1.5%的氯化钠溶液进行沉淀过滤；加入1.7 倍体积的无水乙醇再次进行沉淀过滤，所得沉淀物于60 ℃下干燥即得最终产品，其产率相对较高。 （4）稀碱浓盐提取工艺 将粉碎好的软骨碎片称重后，加入骨质量5倍的0.4%氢氧化钠和20%的氯化钠混合溶液（pH为13），室温下进行浸提30h（分两次进行），用盐酸调pH到7.8，升温到80～90℃，加入骨质量4%的滑石粉，将盐解液调节pH到2～3，过滤1h，将滤液加入1.5倍体积的水进行稀释，同时调节pH到6.5，加入1.7倍体积的无水乙醇沉淀12h，将沉淀物加入1.5%的氯化钠溶液进行沉淀过滤，加入1.7倍体积的无水乙醇再次沉淀8h，所得沉淀物于60℃下干燥即得最终产品，其生产周期长但产率较高。以上4种工艺路线制得的硫酸软骨素含量和氨含量都符合原料药的要求。但是，这4种路线都存在有缺陷：采用稀碱温和条件下制备的样品溶液混浊，且时间长，污染严重，其原因在于该条件下软骨中的胶原蛋白、黏蛋白等不能完全水解，且它在中性盐和弱酸溶液中是可溶的，在溶液中不易被除去。最主要的是这些工艺的生产周期都太长，极大地限制了工厂的生产效益和经济效益。 1.3 酶提取法 （1）稀碱-酶解提取法 邹开朗等[4]提出稀