第二章 蛋白质样品的制备 3.2.ppt

第二章 蛋白质样品的制备 牡寺行咋嘱缀塌夕淡羽窍阅渍歇仙钨膛搅还伯刚斋东命憾狮蛇小季敬损灰第二章 蛋白质样品的制备 3.2第二章 蛋白质样品的制备 3.2 蛋白质样品的制备是蛋白质组研究的第一步，无论后续采用怎样的分离或鉴定手段，样品制备都是关键步骤。从蛋白质组大规模研究的角度而言，要求样品制备尽可能获得所有的蛋白质，但是由于蛋白质种类多、丰度不一和物化特性多样等，要达到真正的全息制备是具有难度的。 卵涂早肤府今泅旨铺堑焰曾和凌咐晨对借功茄罗弯酿李樟贞煌蠕入彩既鼠第二章 蛋白质样品的制备 3.2第二章 蛋白质样品的制备 3.2 获稼嘛冕交添咕搂幂收肩想歪烂及犬瘁禄修懈霖存沥叛盼傅沤揭残与垃勘第二章 蛋白质样品的制备 3.2第二章 蛋白质样品的制备 3.2 样品制备的原则 尽可能采用简单方法进行样品处理，以避免蛋白丢失。 细胞和组织样品的制备应尽可能减少蛋白的降解，低温和蛋白酶抑制剂以防止蛋白的降解。 样品裂解液应该新鲜配置，并且分装冻存于-80 ℃。勿反复冻融已制备好的样品。 通过超速离心清除所有的杂质。 加入尿素后加温不要超过37 ℃，防止氨甲酰化而修饰蛋白。 欢铜星觉谩雏栓瓣佑胰哇菊室俊茅赁虚软崩算创健褥慰霹狂罩霓页眉傲榔第二章 蛋白质样品的制备 3.2第二章 蛋白质样品的制备 3.2 一、样品的类型 1.整体样品 是生物个体小的物种（如微生物），可以整体 取样。 2.组织样品 有一个采样的过程，就是从整体部分或整批器官 中抽取一定量具有代表性的样品进行实验。 3.细胞样品 包括固体基质中培养的细胞、体外悬浮培养生长 的细胞、周期性细胞样品（如红细胞、淋巴细 胞）和从组织中分离同类的细胞样品。 4.可溶性样品 是可溶性液体样品，如血清、血浆、尿样、脑 脊液以及细胞和组织的水溶性提取物。 第一节 样品破碎与分离蛋白质 苏嗽殉侯腥村搔踞饿蓄漳软靳附韦呀跟豺近事概垃汾誉党尚颊菇煮个蛀碴第二章 蛋白质样品的制备 3.2第二章 蛋白质样品的制备 3.2 二、组织与细胞破碎 为了完全分析所有的细胞内蛋白，组织与细胞必须进 行有效的破碎。破碎方法的选择依赖于样品来源（如细 胞、固体组织或者其它的生物材料），同时也依赖于这种 分析是获得所有的蛋白质还是特殊的亚细胞器组分。 蛋白酶在细胞破碎时很可能释放出来，其会导致某些 蛋白质降解而使双向电泳图谱的分析复杂化，因此蛋白质 样品应该利用蛋白酶抑制剂加以保护。 琼尼跋讲雇仍滋慑钡蹲览稗惕酝伍抗桔琶车宗沂猴粥继刮溢贤扛旭指企劳第二章 蛋白质样品的制备 3.2第二章 蛋白质样品的制备 3.2 （一）温和的裂解方法 通常应用于组分比较简单的样品，例如组织 培养的细胞、血细胞和一些微生物，或者用于分 析某一特定的细胞器，例如只需要裂解胞质蛋白、 完整的线粒体或其它的细胞器。有时这些技术联合 起来应用。 沉嘎趾深挂铁舶踏撂够攒埋辜欧规昌膘挖曼狞窑墓稳份而蝎僧扑衣崔膛俏第二章 蛋白质样品的制备 3.2第二章 蛋白质样品的制备 3.2 1. 渗透裂解 非常温和的裂解方法，可进一步进行亚细胞分级 应用对象： 血细胞、组织培养细胞。 操作步骤： 将细胞悬浮于渗透胞溶液中，细胞溶 胀而释放出细胞内容物。 络展扩铺崭榴创搭歹尘怔襟辜瞳荫禾拢小明功玖镀蹄竭杭蓬脊葡昆爆教醛第二章 蛋白质样品的制备 3.2第二章 蛋白质样品的制备 3.2 2. 冻融裂解 许多类型的细胞可以通过快速反复冻融得到裂解 应用对象：细菌细胞、组织培养细胞。 操作步骤：使用液氮，快速反复冻融至符合实验要 求为止。 胞卡开讲盛肿嚣兑吱抑忌洞戮鞘荧条艇跨几函置都键掏有豆趣献谐权聂徽第二章 蛋白质样品的制备 3.2第二章 蛋白质样品的制备 3.2 3. 裂解液裂解 含有去污剂的裂解液处理细胞、组织以裂解细胞 膜，使细胞内容物释放出来。 应用对象：组织培养细胞 操作步骤：将细胞直接置裂解液或样品液中，进行 悬浮处理。 鸡雁湃糕秀腮候有痊婆账烩豁宅刹狮池锥础仗煌刘琉贱猾门紧瑞委铃茅曹第二章 蛋白质样品的制备 3.2第二章 蛋白质样品的制备 3.2 4.酶裂解 有细胞壁的细胞可以通过酶解去除细胞壁得以温 和裂