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精液检查及精子制备技术方法 —、精液常规检查操作方法 实验者收到取精杯后应首先核对取精杯上姓名、编号是否与精液送检单符 合，同时核对精液送检报告上是否漏填重要信息，确认无误后方可接受，同时记 录精液采集时间，按《WHO人类精液及精子一宫颈粘液相互作用实验室检验手册 (第四版)，以下简称WHO实验手册》所规定的方法作精液常规检查，并以其规 定格式出检验报告。同—份精液标本若有多个检查项目，按各项目要求分别作标 本处理和检验。 （—)初步检验： l液化后精液检查前应认真记录：精液分析处理通知单所提供的详细资料 2记录：精液量、颜色、粘度、PH值及液化时间 3取液化精液10~20微升，滴于洁净载玻片上加盖玻片静置片刻 4置生物显微镜下，观察精液大致状况并记镜下所见：圆细胞数(生殖道上皮细 胞、生精细胞和白细胞)、红细胞数和凝集团块等，并以 个／HP表示。 (二)操作方法： l取液化后精液3—5微升，滴于MACRO计数板中央计数池内，加盖； 2置生物显微镜下观察精子浓度及活力。具体方法为：计数10个小格内a、b、 c、d各级精子数量，a+b+c+d之和即为精子浓度(X106／mL)，精子活力分别 以a级精子、a+b级精子和c级精子占总精子的百分比表示，计算方法分别如 下： a／(a+b+c+d)X100％、(a+b)／(a+b+c+d)X100％、c／(a+b+c+d)X100％。 附精子分级标准 a级：表示精子为快速前向运动 b级：慢速或呆滞的前向运动 c级：非前向运动 d级：不运动 （三)检验后处理 1以清水冲洗MACRO计数板； 2以酒精擦拭显微镜台面及实验台面 3一次性实验物品丢弃于指定地点； 4剩余标本按规定进行污物处理。 二、精子形态分析操作方法 l取液化后精液20uL，滴于载玻片一端（上约1/3处） 2用另一张载玻片，置于滴有精液处与其形成30度角，均匀拉开液滴（详见WHO 实验手册)．置室温干燥； 3将干燥后的载玻片置于90％酒精液中固定15分钟，取出室温干燥后行巴氏染 色； 4 l00X油镜下行精子形态学分析， 结果描述：(参阅WHO实验于册) 正常形态率——％ 异常形态率——％（分别记录：头、体、尾及混合畸形率）； 三、精子低渗膨胀实验(HOS) (—)配制低渗膨胀液 溶0．735g枸橼酸钠和1.351g果糖于100ml蒸馏水中,将该 溶液分装冰冻，于一20℃存放。用前解冻并充分混匀。 (二)实验方法 l取1mL膨胀液于一只加盖的Eppendorf试管中，37℃温热约5min。加入约0.1mL 液化的精液，并用吸管轻轻搅匀。 2在37℃下至少保持30没min(注意：不要超过120min)，并用相差显微镜观察精 子细胞。 3将所计数的200个精子中膨胀精子数重复计数两遍，并计算平均百分比。精子 尾部形状发生变化的定为精子膨胀。 (三) 结果描述 如果精液标本中有60％以上的精子出现尾部肿胀，则描述为“HOS试验正 常”。如果尾部肿胀的精子数低于50％，则描述为“HOS试验异常” (四)注意事项 l某些精液标本在置于HOS溶液前会出观尾部卷曲的精子，因此要在放置于HOS 溶液前观察射精液。处理后所获得的尾部卷曲的精子的百分比减去未处理标本中 尾部卷曲的精子的百分比，即可以得到HOS试验中出现反应的精子的实际百分比 2在临床使用之前，应当用老批号的HOS溶液对新批号的HOS溶液进行校验，评 分不应有显著性差异（配对t检验p0.05)。如果差异显著，应废弃该批试剂， 重新配制。 四、全自动精子分析系统使用说明(MIAS 2．0医学图像分析系统) 全自动精子分析系统可自动探测精子运动轨迹，按WHO中CASA各项参数指 标，计数精子活率、活力分级、密度、直线运动速率等。由电脑软件和显微镜 两部分组成。其操作方法如下： (一)初步检验：参见粘液常规检查操作方法相关部分 (二)自动分析： l开启电脑→精子分析系统→建立新档案(键入患者相关内容)→保存 2取液化后精液3～5微升，滴于精子计数板中央计数池内，加盖玻片→置显微 镜下(20X)调节视野至图像清晰 3点击轨迹分析→图像捕捉→选择去非精子细胞参数→键入细胞数→分析→ 保存结果→分析结束(总计分析3—5个视野) →报告单（选择报告预览或报 告打印) →退出分析系统 4报告部分内容记录于门诊登记簿 (三)分析后处理：参见精液常规检查操作方法相关部分： 五、抗精子抗体(MAR)检测方法 (一)原理；本实验以人IsG敏化绵羊红细胞，用人北G制备羊抗人北c血 采用l仪R法检测标本中Ig6类抗精于抗体。试剂山八液、9液、C液组成。 二)步骤； 1取液化精液20微升滴于载圾片上，加入A液20微升混匀，放置娟秒； 2加入D液混匀，加盖玻片。分别在3分