保健食品中大蒜素的测定.docVIP

附件： 一、保健食品中大蒜素的测定 1 范围 本方法适用于以大蒜及其制品为原料的保健食品中大蒜素（三硫二丙烯，C6H10S3）的含量测定。 本方法最低检出浓度为0.0430mg/mL；取100mg试样，提取定容5.0mL时，试样中大蒜素最低检出质量浓度为0.20g/100g。 本方法最佳线性范围： 0.320mg/mL～3.00 mg/mL。 2 原理：根据大蒜素为挥发性油成分，经有机溶剂提取，用气相色谱仪分析，采用外标法定量。 3 试剂 除特殊说明，所用试剂均为分析纯。 3.1 无水乙醇 3.2 正己烷 3.3 标准溶液：称取0.1000g标准品，置于10mL容量瓶中，用正己烷定容至刻度，该溶液中含大蒜素浓度为10.0mg/mL。此溶液可在冰箱中保存七天。取该溶液1.0mL，置于10mL容量瓶中，用正己烷定容至刻度，此溶液含大蒜素浓度为1.0mg/mL。 4 仪器 4.1 气相色谱仪：附氢火焰（FID）检测器 4.2 数据处理机或积分仪 4.3 分析天平：万分之一 4.4 超声清洗机 4.5 离心机：3000r/min 5 分析方法 5.1 试样提取 5.1.1 固体试样：称取试样适量（相当于含大蒜素5mg，精确至0.001g），加无水乙醇适量，密塞，超声70min，取出冷却，加正己烷定容（调节大蒜素含量约为1mg/mL），振摇，静置分层后，取上层溶液进样。 5.1.2 液体试样 吸取试样适量（相当于含大蒜素5mg，精确至0.001g），置于分液漏斗中，加5mL正己烷振摇提取1min，静置（或离心）分层后，取上层溶液进样。 5.2 气相色谱参考条件 5.2.1 色谱柱：HP-5(30m×0.25mm) 5.2.2 柱箱温度：100℃（3min） 5.2.3 进样口温度：220℃ 5.2.4 检测器温度：250℃ 5.2.5 载气：氮气（1mL/min） 5.2.6 氢气：40mL/min；空气：400mL/min 5.2.7 进样量：1μL 5.3 定性分析：在参考操作条件下，以对照品与试样比较保留时间定性。 5.4 定量分析：试样中大蒜素色谱峰面积或峰高与标准的色谱峰面积或峰高比较定量。 5.5 结果计算 W = ×100 式中： W—大蒜素的含量，g/100g（g/100mL）； A1—试样使用液色谱峰面积或峰高； A2—标准使用液峰面积或峰高； C—标准使用液浓度，mg/mL； V—试样定容体积，mL； m—试样量，g（mL）。 计算结果保留三位有效数字。 二、保健食品中芦荟苷的测定 1 范围 本方法适用于以芦荟及其制品为原料的保健食品中芦荟苷含量的测定。 本方法的最低检出量10ng。 本方法的最佳线性范围：0～100μg/mL 2 原理：用甲醇+水（55+45）作为溶剂，提取试样中的芦荟苷，经高效液相色谱仪C18 柱分离，在紫外293nm 波长下检测，以芦荟苷保留时间定性，峰面积定量。 3 试剂 除特殊说明，所用试剂均为分析纯，实验用水符合GB/T 6682-2008一级水要求。 3.1 甲醇：色谱纯 3.2 芦荟苷标准品：纯度≥98% 3.3 芦荟苷标准溶液：精确称取芦荟苷标准品10.0mg，加流动相甲醇+水（55+45）溶解并移入100mL容量瓶中，定容至刻度。精密移取5mL至10mL容量瓶中，加流动相定容至刻度。 4 仪器设备 4.1 高效液相色谱仪：附二极管阵列或紫外检测器 4.2 色谱柱：C18（以十八烷基键合硅胶填料为填充剂）或具同等性能的色谱柱，150mm×6mm，5μm。 4.3 超声波清洗器 4.4 C18净化富集柱C18预柱装量0.5g：分配型 4.5 离心机：3000r/min 5 色谱参考条件 5.1 流动相：甲醇+水=55+45 5.2 流速：1mL/min 5.3 柱温：40℃ 5.4 检测波长：293nm 5.5 灵敏度：0.016AUFS 5.6 进样量：10μL 6 分析步骤 6.1 试样制备：将固体试样粉碎成粉末状，混匀，称取适量试样（相当于含芦荟苷2.5mg，精确至0.001g）于50mL容量瓶中，加检测用流动相30mL，混匀，经超声振提5min，加流动相定容50mL，离心沉淀，上清液经滤膜（0.45μm）过滤，芦荟汁饮料直接经0.45μm 滤膜过滤。 6.2 测定步骤：分别精密吸取标准溶液和试样溶液10μL 注入高效液相色谱仪，依上述色谱条件，以保留时间定性，用外标法计算试样中芦荟苷的含量。 7 结果计算 X = 式中： X—试样中芦荟苷含量，mg/g（mg/mL）； A1—试样中芦荟苷的峰面积或峰高； C—标准液的质量浓