细胞学研究法报告微生物学研究所.docVIP

細胞學研究法報告 微生物學研究所 碩一 陳桂貞 培養基 培養基依其來源及種類可分成天然培養基以及人工合成的培養基。 天然培養基 天然培養基是指來自動物體液或利用組織分離提取的一類培養基，如血漿、血清、淋巴液、雞胚浸出液等。組織培養技術建立早期，體外培養細胞都是利用天然培養基。但是由於天然培養基制作過程複雜、批間差異大，因此逐漸為合成培養基所合成培養基合成培養基是研究和了解細跑所需成分基礎配而成的，目的在創出與體內相似的生存環境。合成培養基有固定的組成成分，利控制實驗條件標準化。合成培養基的應用極大的促進了培養細胞的發展。合成培養基成為現今普遍使用的培養基。但合成培養基尚未成為十分完全的培養基，它只能維持細胞不死，不能促細胞增殖生長，使用時還需添加天然培養基，主要是牛血清。牛血清中含有促細胞增殖的各種生長因子和其它利細胞生存的物質，因此當前使用合成培養基時尚需添加天然培養基一、合成培養基的種類 人體內細胞雖有共同的需要，但隨細胞種類不同又有所別。因此合成培養的種類也很多。當然有的培養基原初雖為培養個別細胞所設計，而其適應性卻很廣，能適很多細胞生長，RPMI 1640就屬這類培養基。不過在很多情況下，還應加以選擇，選擇的條件除理論上考慮個別細胞的持殊生理需要外，重要的是看其究能否細胞生長增殖。所有合成培養基都含有一些共同成分，因此在組成上大同小異，差異在基本成分量的變化和少數特殊成分的存在與否。 最初，人們曾設想備出不加任何天然成分的合成培養液。一開始有人試驗在生理鹽水中加入一些氨基酸或葡萄搪，發現可以延長雞胚組織存活的時間。1960年在此基礎上，“199”合成培養液間世，開始了合成培養液的歷史。“199”培養液含有69種成分，幾乎包括了所有的氨基酸、維生素和一些核酸衍生物、生長激素、脂類，加上硝酸鐵和Earle生理鹽溶液。這是一個較為雜的合成培養液，曾被廣泛用作各類細胞的培養，但事實上如只用“199”進行培養細胞，僅能短期維持生存，細胞不能長期生長和增殖，只有加了血清之能成為生長培養基。來在“199”的基礎上，補加了還原劑、輔而省略了幾種B族維生素，改良成為“858”培養液。它可以在不加血清的情況下，能支持幾種細跑較長時期地培養。與此同時人們又設計了一種更為雜的NCTCl09培養液，它能支持許多細胞系的生長。雖然如此，在用這些培養基時，如果不加血清，對大多數細胞來說仍只限維持生存，卻不能使細胞長期生長和增殖。“199”和“109”等合成培養液由成分較為雜，近年已很少使用。 目前常用的是來設計的MEM Eargle培養液。它僅含有12種必需氨基酸、谷氨析胺和八種維生素，成分簡單，可廣泛適應備種建成細胞系的培養。同時，易添加或減少某些成分，也特別適特殊研究的細胞培養工作。在它的基礎上，又改良成DMEM（DulboccoMEM）DMEM增加了各成分的用量（加倍），葡萄糖用量可選擇高糖（1OOOmg/L）或低糖（4OOmg/L）低糖對生長速度較快、附著性稍差的腫瘤細胞生長有利。高糖則特別適用附著性較差，但又不希望它脫原來生長點的克隆培養效果較好，所以常用雜交瘤技術中骨髓瘤細胞和DNA轉染的轉化細跑的培養。 RPMI1640也是一種常用的培養液，最初是針對淋巴細胞的培養而設計。問世發現它能廣泛適應許多種類的細胞的培養，包括正常細胞和腫瘤細胞的培養，而且成分簡單，和MEM一樣，應用己極其廣泛。 Mc-Coy5A和HamFl2是兩種特殊用途的合成培養液。Mo-Coy5A是一種為肉瘤細胞設計的培養液。發現它除適用原代細胞培養、組織活檢的細胞及淋巴細跑生長外，還特別適用較難培養的細胞。HamF12是在HamFlO基礎上改良的，它們和其它合成培養液不同的是使用了一些微量元素的子，如Cu2＋、Zn2＋、Fe3＋等。可以在血清含量較少（2﹪一10﹪）的情況下培養細胞，而且特別適用單細胞的培養，因此常用作單細跑克隆化培養。除上幾種培養液外，還有許多種其它培養基，但特點不明顯，不再贅述。 二、合成培養的成分 合成培養液的主要成分是基酸、維生素、碳水化合物、無機子和一些其它輔助物質。 （一）機酸 基酸是組成蛋白質的基本單位。不同種類的細胞對基酸的要求各異，但有幾種基酸細胞自身不能合成，必須依靠培養液供給。這幾種基酸稱必需基其氨基酸為非必需氨基酸，細胞可以自己合成，或由其它物質轉化而來。培養液中都含有必需氨基酸，幾乎所有的細胞對谷氨西胺有較高的要求。細胞需要谷氨西胺賴以合成核酸和蛋白質，在缺少各氨西胺時，細胞生長不良而死亡。所以各種培養液中都含有較大量的谷氨西胺。谷氨西胺在溶液中很不穩定，應置-20℃冰凍保存， 用前加入培養液內。已含有谷氨西胺的培養液在4冰箱中貯存兩以上時，還應重新加入原來量的谷氨西胺。細胞所能利用的氨基酸是L