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细胞工程复习绪论细胞工程是一个什么样的学科，在现代生物技术中处于什么地位？ 细胞工程是按照一定的设计方案，通过在细胞、亚细胞或组织水平上进行实验操作，获得重构的细胞、组织、器官以及个体，创造优良品种的综合性生物工程。 细胞工程是生物技术的桥梁与纽带。细胞工程的研究内容和研究技术有哪些？主要研究：细胞与组织培养 细胞融合与单克隆抗体 细胞核移植 染色体工程 胚胎工程 干细胞与组织工程 转基因生物与生物反应器。核心技术：细胞培养与繁殖细胞工程在哪些领域可以得到应用。1.改善农业生产技术2.保护自然资源，维护生态平衡 3.生物医药开发第1章 细胞培养的设施与基本条件1.了解理想的细胞工程实验室应包括哪些实验室，分别执行什么功能。超净工作台、二氧化碳培养箱、倒置显微镜、电热干燥箱、水纯化装置、低温冰箱、高压蒸汽消毒器、过滤除菌装置、离心机、天平、移液管和吸管、离心管、移液器等2.超净工作台分几类？它们的特点各是什么？外流式工作台操作和拿取物品较为方便,但可能受外界气流流动的影响而引起不洁空气混入.侧流式工作台在净化气流和外边气体交界片可因气流的流动出现负压,使少许未净化气体混入,有发生污染的可能第2章清洗与消毒1.玻璃器皿的清洗方法（包括浸泡、涮洗、浸酸、冲洗）2.细胞培养过程中常用的消毒方法中哪些，分别适合消毒哪些物品。1．物理消毒法 (1)射线消毒灭菌 主要使用6OCo、X射线进行消毒灭菌，可用于牛血清和塑料制品的灭菌。 (2)紫外线消毒 用于消毒空气、操作台面和一些不能用干热、湿热灭菌的培养器皿，如塑料培养皿、培养板等。这是常使用的消毒方法之一。 (3)干热灭菌 主要用于玻璃器皿的灭菌。(4)湿热灭菌 此方法也称为高压蒸汽灭菌，是最有效的一种灭菌方法。主要应用范围是布类、橡胶制品(如胶塞)、金属器械、玻璃器皿、某些塑料制品以及加热后不发生沉淀的无机溶液(如Hanks液、PBS、20×SSC等)。(5)滤过除菌 用于培养用液和各种不能高压灭菌的溶液的灭菌。2．化学消毒法(1)70％(或75％)酒精：用于手和一些金属器械或工作台面的消毒。(2)0．1％新洁尔灭：主要用于手和前臂的清洗以及工作后超净台面的清洁。 (3)来苏儿水(煤酚皂溶液)：主要用于无菌室桌椅、墙壁、地面的消毒和清洗，以及空气喷撒消毒，特别是污染细胞的消毒处理。(4)0．5％过氧乙酸：用于各种物品的表面消毒，用喷撒和擦拭方式进行。 (5)乳酸蒸气：可将空气中漂浮的微生物杀死。 (6)37％甲醛加高锰酸钾：使用前先紧闭门窗。3．煮沸消毒 急性消毒可用煮沸法，器械等煮沸15 min后使用。 第3章 细胞培养的基本方法1.相差显微镜的工作原理以及相差显微镜与普通显微镜的三个不同点是什么？P262.无菌操作要点。P251. 实验进行前，无菌室及无菌操作台(laminar flow) 以紫外灯照射30-60 分钟灭菌，以70 % ethanol（乙醇） 擦拭无菌操作抬面，并开启无菌操作台风扇运转10 分钟后，才开始实验操作。每次操作只处理一株细胞株，且即使培养基相同亦不共享培养基，以避免失误混淆或细胞间污染。实验完毕后，将实验物品带出工作台，以70 % ethanol 擦拭无菌操作抬面。操作间隔应让无菌操作台运转10 分钟以上后，再进行下一个细胞株之操作。 2. 无菌操作工作区域应保持清洁及宽敞，必要物品，例如试管架、吸管吸取器或吸管盒等可以暂时放置，其它实验用品用完即应移出，以利于气流之流通。实验用品以70%ethanol 擦拭后才带入无菌操作台内。实验操作应在抬面之中央无菌区域，勿在边缘之非无菌区域操作。 3. 小心取用无菌之实验物品，避免造成污染。勿碰触吸管尖头部或是容器瓶口，亦不要在打开之容器正上方操作实验。容器打开后，以手夹住瓶盖并握住瓶身，倾斜约45°角取用， 尽量勿将瓶盖的盖口朝上放置桌面。 4. 工作人员应注意自身之安全，须穿戴实验衣及手套后才进行实验。对于来自人类或是病毒感染之细胞株应特别小心操作，并选择适当等级之无菌操作台(至少Class II)。操作过程中，应避免引起aerosol（浮质）之产生，小心毒性药品，例如DMSO 及TPA 等，并避免尖锐针头之伤害等。第4章 动物细胞培养1.体外培养细胞的分型贴壁型细胞：大多数哺乳动物 细胞必须附着在带适量正电荷的固体或半固体表面才能生长，属于贴壁依赖性细胞，大致分为以下四种类型：a.上皮细胞型b.成纤维细胞型 c.游走细胞型d.多形型细胞悬浮型细胞:与微生物与植物细胞不同，动物细胞只有极少数细胞体外生长不必帖壁，可在培养液中悬浮生长，称为悬浮型细胞，血液淋巴细胞，白细胞，某些肿瘤细胞等属于此类细胞。培养细胞的三大生长特点：贴附、接触抑制和密度抑制。贴附贴附并延伸是贴壁细胞体外培养时的基本生长特点接触抑制由细