植物组织内可溶性蛋白质含量测定.pptVIP

蛋白质含量测定 南京晓庄学院生命科学系 一 实验原理 利用考马斯亮蓝能使蛋白质染色的特性，能快速简单地测定蛋白质的含量，本方法的灵敏度较高，且不受游离氨基酸和小肽的影响。 二 实验器材和试剂 实验仪器： 分光光度计 分析天平 样品 容量瓶 移液管 实验材料：芦荟 实验试剂 标准牛血清蛋白溶液 染料试剂 三 实验步骤 1 取芦荟叶片0.1剪碎，从磷酸缓冲液研磨，倒入10ml 离心管中，定容到10 ml，12000 pm离心，20min 得上清液作为待测样品。 2 取0.5 ml提取液叫上5 ml考马斯亮兰试剂，摇匀在30摄氏度水浴 20min ，于595nm处测得OD值。 3 制定标准曲线，配制20 40 60 80 100 mg/ml牛血清蛋白液，同2法测595nm 处的OD 值，以蒸馏水加考马斯亮兰试剂为作照。 四 计算 芦荟：0.067 0.067=0.0042 x-0.0141 x=19.31mg/ml 蛋白质含量=19.31*10/0.1*1000000 =0.193％ 五 注意事项 由于取的组织不同，所以 OD值相差较大。 研磨须充分，否则溶解后析光时所得数据并不是1克植物量对应值。 标准溶液的测定实验组同时进行，以免引起误差。 * *