联吡啶Cu(Ⅱ)配合物与DNA的相互作用研究.docVIP

联吡啶-Cu（Ⅱ）DNA的相互作用研究 摘要 以2,2‵—联吡啶为配体合成了联吡啶-Cu（Ⅱ）〔Cu(bipy)22+〕Cu(bipy)22+配合物与DNA的相互作用。结果发现Cu(bipy)22+配合物与DNA之间有较高的结合常数K=0.324×104L/mol并且k+/k2+=0.76表明Cu(bipy)22+配合物与DNA的键合作用是Cu(bipy)2+配合物与DNA键合作用的1.3倍。证明了Cu(bipy)22+配合物与DNA之间的作用方式为静电引力。 关键词 Cu(bipy)22+配合物 DNA 相互作用 1 引言 脱氧核糖核酸（DNA）是生物体中的重要组成部分，是遗传信息的携带者，也是基因表达的物质基础。它在生物的生长发育和繁殖等生命活动中具有十分重要的作用，因此DNA是现代生物学和医学研究的重要课题之一。小分子与DNA的相互作用的研究是新型药物分子设计的理论基础。近几年来，人工合成的过渡金属配合物与DNA的相互作用引起人们的关注。例如，邻二氮菲-Cu(Ⅱ)[1]，Fe-EDTA[2]，卟啉-Mn（Ⅱ）[3]Ru（Ⅲ）[4][5-7]。本文以2,2‵—联吡啶为配体合成了[Cu(bipy)2]Cl2配合物。将光学与电学相结合，研究了Cu(bipy)22+配合物与DNA的相互作用。研究表明，该配合物与DNA有较高的结合常数，且Cu(bipy)22+ 配合物离子与 DNA的键合作用强于 Cu(bipy)2+ 配合物离子与DNA的键合作用。结果显示，它们之间的相互作用为静电引力。 2 实验部分 2.1 仪器与试剂 930荧光光度计（上海第三分析仪器厂）； TU-1901双光束紫外可见分光光度器（北京普析仪器有限公司）；LK2005型电化学工作站（天津兰力科化学电子高技术有限公司）； 三电极体系：工作电极为金电极，参比电极为饱和甘汞电极，对电极为铂丝电极；PHS-3C型酸度计（上海天达仪器有限公司） Cu(bipy)22+配合物的制备与文献报道的一致，实验是在室温下进行的。DNA为上海伯奥生物科技有限公司产品，使用时没有进一步纯化，储存在4℃条件下，使用寿命不超过5天。DNA的浓度（以核苷酸计）确定是以在260 nm 处的摩尔吸光系数为6600M-1cm-1[9]计算得到的。Tris是上海伯奥生物科技有限责任公司产品。其它试剂均为分析纯； 2.2 实验方法 荧光和吸收光谱：固定Cu(bipy)22+配合物浓度，加入不同浓度DNA，记录吸收光谱和荧光光谱。吸收光谱的参比液为同浓度的DNA溶液。支持电解质为10mMTris-HCl缓冲溶液（pH=7.4）。 循环伏安和示差脉冲曲线：实验前，工作电极金圆盘电极用0.25μMAl2O3抛光，接着超声清洗。实验有三电极系统构成，在一个简单的电解池中进行；支持电解质为50mMTris-HCl缓冲溶液（pH=7.4）。 3 结果与讨论 3.1 吸收与荧光光谱 在Cu(bipy)22+配合物浓度为5.0×10-4M和50mMTris-HCl缓冲溶液的体系中，加入不同浓度的鱼精-DNA，记录的吸收光谱见图1。当DNA浓度增加时，体系的吸光度减小。根据方程[8] c/Δεap=c/Δε+1/(ΔεK) 其中Δεap=(εa-εf), Δε=(εb-εf), εa=Aabc/c(Cu(bipy)22+)，εbεf分别为Cu(bipy)22+与DNA结合态和游离态Cu(bipy)22+的摩尔吸收系数。根据方程，以c/Δεap对c(DNA)作图，由直线的斜率与Y轴截距之比求得Cu(bipy)22+配合物与DNA作用的结合常数为0.324×104L/mol。较高的结合常数表明，Cu(bipy)22+配合物与DNA发生了较强的相互作用。 图1 Cu(bipy)22+配合物加入不同浓度 图2 Cu(bipy)22+配合物加入不同浓度 DNA的吸收光谱图 DNA的荧光光谱图 Fig.1 The dependence of absoution spectra Fig.2 The dependence of fluorescence of Cu(bipy)22+ complex on the spectra of Cu(bipy)22+ complex concentration of DNA on the concentration of DNA [DNA]/(mol L-1) [DNA]/(mol L-1) 1.0; 1.0;