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诱导多能干细胞（iPSCs）研究现状与前景展望 刘兴夏* 肖羽恒* 张峰伟* （*桂林医学院12班） 联系方式 研究现状与前景展望 刘兴夏* 肖羽恒* 张峰伟* （*桂林医学院12班） 【摘 要】本文介绍干细胞基础研究的最新（induced pluripotent stem, iPS细胞 【关键字】iPSCs); ESCs;重编程;文献计量学;研究现状 2006年, 日本京都大学Yamanaka (山中伸弥)教授所率领的研究小组筛选出了4个在胚胎干细胞或肿瘤细胞中高表达的基因转录因子(Oct4/Sox2/Klf4/c-Myc, OSKM), 并利用逆转录病毒载体将这些因子转染到小鼠成纤维细胞中[]。通过这些因子在受体细胞内过量表达, 诱导成纤维细胞去分化, 使成体细胞重编程为多能干细胞, 并将其定义为诱导多能干细胞 (Induced pluripotent stem cells, iPS)。iPS细胞的主要特征表现为：能够形成ESC细胞样的集落, 胞核较大核质比高, 碱性磷酸酶(AP)染色呈阳性, 表达内源性Oct4、Sox2和Nanog, 端粒酶活性提高, 能在裸鼠体内形成畸胎瘤等。经基因芯片分析, iPS细胞的基因表达谱与细胞相类似, 而与诱导之前的受体细胞明显不同[]。Shinya Yamanaka因为这项开创性的实验荣获2012年诺贝尔生理学或医学奖。 1 iPSCs技术的发现 第一股潮流是对核移植的重编程研究。1962年, John Gurdon报道了他堪称经典的实验室研究成果: 将未受精的卵转入成年蛙的小肠细胞核可以发育成蝌蚪[5]。三十多年后, Ian Wilmut及其同事报告了多莉羊的诞生, 这是通过哺乳类上皮细胞的体细胞克隆产生的首个哺乳类动物[6]。这些体细胞克隆的成功证明了: 即使已经分化的细胞也含有整个生物体发育所需要的全部遗传信息, 卵母细胞含有可以重编程体细胞核的因子。 第二股研究潮流是发现“ 主控的” 转录因子。1987年, 科学家证明哺乳动物转录因子MyoD能将成纤维细胞转换为肌细胞[7]。这些结果形成了“主控的调节因子”概念, 该转录因子决定并诱导细胞谱系的命运。 第三股研究潮流涉及ESCs, 具有以上同样的重要性。自1981年第一代小鼠ESCs[8]建系之后, Aus-tin Smith 等确立了能够长期维持干细胞多能性的体外培养条件[9]。 结合前两个研究潮流, 我们提出这样一种假设: 卵母细胞或ESCs中存在一种多个因子的组合, 这种组合可以将体细胞重编程回到胚胎状态, 于是有人[1][10]设计实验来确定这种组合。 2 iPSCs技术的成熟和理解 2.1重编程概述 细胞核重编程是指, 成熟的细胞由分化的状态被逆转到一种未分状态的过程[12].细胞核的重编程现象最早是在核移植实验中被发现的[13].然而, 体细胞核移植实验也具有很大的局限性: 克隆的效率极低; 产生的许多后代在各个阶段都体现出严重的发育异常; 由于需要使用卵母细胞, 人的核移植实验受到强烈的伦理学质疑.这些不足, 都制约了核移植技术的进一步发展和应用.其次, 将成熟的体细胞与多潜能的细胞 (ES细胞、胚胎癌细胞(EC细胞) 等) 融合[14~17], 或者用胚胎干细胞提取物来处理体细胞[18][19], 也可以在一定程度上使体细胞发生重编程.利用这两种方法, 可以实现某些多能性标志分子的重新表达和多种分化潜能的获得.但是这两种方法也有明显的弊端. 体细胞与多能性细胞的融合效率比较低, 融合之后的细胞具有两套染色体, 并且在移植后会发生排斥现象[20]. 通过外源导入与多能性相关的转录因子来诱导体细胞核发生重编程, 从而使体细胞转变成多能性干细胞, 是一种具有很强创新性的研究方法, 这种新方法与上述几种方法相比, 相对简单, 摆脱了材料来源和伦理学的诸多限制, 重编程的效率和程度都十分可观, 因而该研究成果引起了生命科学领域一次巨大的轰动. 2.2 “初始化”之谜 体细胞在外源转录因子的诱导下的重编程之后会被“初始化”到一种具有多种分化潜能的状态由于何种启动了重编程的程序, 随着研究进展有多种不同的说法。Yamanaka在当时的条件下, 他们检测了4 种基因的不同组合方式能否产生iPS 细胞, 结果表明, 这4个基因中的任意2个或3个组合, 都无法形成具有ES细胞特性的iPS 细胞, 说明这4个基因缺一不可. 这就是这4个关键基因( Oct4 , Sox2, c- yc 和) 的发现过程. , 除了Thomson 等人[22]利用自己的方法筛选出了另外一套基因组合之外, 几乎其他所有关于iPS 细胞的研究都采Yamanaka 和Tak