第四章分子生物.docVIP

第三章 DNA复制 (DNA Replication) 无论细胞只有一条染色体(原核生物中)还是有多条染色体(真核生物中)，在每次细胞分裂的过程中，整个基因组都必须精确的进行复制。复制的行为是怎样与细胞周期(Cell cycle)联系的呢？ 有两个一般的准则用来比较复制状态和细胞周期的条件： DNA 复制起始保证了细胞(原核或真核)的进一步分裂。从这一立场上说，一个细胞产生的后代数量是由一系列决定能否起始DNA 复制的事件决定的。复制由起始步骤控制。一旦复制开始，它就会继续下去，直到整个基因组都被复制。 如果复制继续，只有这一过程完成后，随后的分裂才能发生。事实上，复制的完成可能会引发细胞的分裂。随后倍增的基因组被分配到两个子细胞中(在真核生物中通过有丝分裂完成)。分配的单位是染色体。 在原核生物中，复制起始与细菌染色体DNA上一特别位点相关，细胞分裂是靠隔膜的生长完成的。在真核细胞中，DNA复制的起始和S期的开始相一致，而且这个过程牵涉到许多独立的起始事件，通过有丝分裂中细部的重新组织（reorganization），建立细胞的分裂活动。在这一章中，我们着重讨论DNA 复制的调控。复制的循环是怎样起始的？是什么因素控制着它的进程，它的终止信号又是什么呢？真核细胞进入S 期和有丝分裂的调控过程，也讨论“检验点(Checkpoint)”，只有在具备合适的条件时，才能通过检验点，继续以后的反应。 第一节 DNA复制概述( Reviews of Replication ) DNA的半保留复制(Semi-Conservation Replication) 在细胞分裂过程中，亲代细胞所含有的遗传信息原原本本地传递个两个子代细胞。我们知道，细胞的DNA携带了细胞的一切遗传信息，因此，亲代DNA也必须准确无误地复制成两个拷贝，并分配到两个子代细胞中去。研究DNA复制的目的就是要了解：①子代DNA为什么能够真实地获得亲代DNA的遗传信息；②复制是怎样进行的；③生物体是怎样对DNA复制进行调控的。 关于前两个问题，Watson和Crick在发表DNA双螺旋结构模型时就讨论过了。在DNA双螺旋中，G只能和C配对，A只能和T配对，因此依照碱基配对原则，任意一条链的碱基序列都可以精确地决定它的互补链的序列。在DNA复制时，只有简单地把DNA双链拆开，每一条链都可以作为模板，从而合成结构上完全一样的两条DNA双链。 半保留复制： 复制过程中各以双螺旋DNA的其中一条链为模 板合成其互补链，新生的互补链与母链构成子代DNA分子 Watson和Crick提出的DNA复制方式称为半保留的复制方式。在理论上还可以设想其他的一些方式，例如全保留和散布式复制。 全保留复制的模型认为，在复制前后DNA都是缠绕在一起的，仅仅是复制位点解开几个碱基便足以使多聚酶阅读并产生新的分子，而亲代分子保留完整。因此在全保留复制中，亲代DNA分子完全不需要解链。 实验证据1958 Meselson-stahl 设计的CsCl超离心试验证实了 DNA复制的这一特性 散布式复制模型认为亲代DNA分子先打成片段然后再互为模板复制。于是亲代DNA片段分散在子代DNA分子中。这个模型可以避开半保留复制中的一些问题。 ＣsＣl密度梯度离心原理： 由于离心力和分子扩散作用，ＣsＣl分子在离心管中，从管底到管口，形成由高到低的密度分布。样品离心后将分别到等同到该物质的密度的部位。 关于这个问题，终于在１９５８年由Ｍ.Ｍeselson和Ｆ.Ｗ.Ｓtahl通过CsCl密度梯度离心方法，得到证明。半保留复制方式的证明，不仅说明了ＤＮＡ的复制方式，更重要的是，在当时，它为ＤＮＡ双螺旋模型提供了最直接的证据。 ＣsＣl密度梯度离心原理：将一定量的ＣsＣl溶解在适当的缓冲液中，在一定强度的离心力的作用下，由于离心力作用ＣsＣl分子具有向离心管底聚集的趋势，同时，由于分子扩散，ＣsＣl分子双具有从高浓度向低浓度扩散的趋势。 这样，在一定时间后，ＣsＣl分子在离心管中，从管底到管口，形成由高到低的密度分布。如果在离心的同时，加上一定样品，样品中不同密度的物质，在离心后就将分布到离心管的不同部位，即等同于该物质的密度的部位。这样，我们就可区分并分离到不同密度的物质。 二、复制起点、方式和方向 1、复制起点（origin ori或 o 复制原点） 复制开始处DNA分子的特定位置 原核生物（Prokaryote）：单复制起点 即－－整个染色体只有一个复制单位 （复制子、复制元）因为所有原核生物和噬菌体的DNA分子只有一个 二、复制起点、方式和方向 1、复制起点（origin ori或 o 复制原点） 复制起点：复制开