鼻咽癌细胞株SP细胞获得的优化处理.docVIP

鼻咽癌细胞株侧群细胞染色条件的优化及其表面标记物的测定 焦锋，邱际华，张千兵，姚开泰，刘求真*（南方医科大学肿瘤研究所，广东广州 510515） 提要：目的 探讨鼻咽癌细胞株侧群细胞所需荧光染料Hoechst33342最佳的孵育时间和浓度。研究细胞密度对侧群细胞比例的影响，并测定其表面标记物CD133和ABCG2蛋白的表达 方法 荧光染料Hoechst33342孵育细胞，选择不同的时间（30，60，90，120，150，180 min）及不同的浓度，用流式细胞仪检测，倒置荧光显微镜观察选择合适的孵育时间和浓度。选取不同生长密度的细胞（70%，100%），流式细胞仪检测侧群细胞比例的变化。荧光抗体CD133和ABCG2共孵育Hoechst33342, 流式细胞仪测定细胞表面标记物CD133和ABCG2蛋白的表达 结果 Hoechst33342孵育时间为70min,侧群细胞染色效果较佳。不同的鼻咽癌细胞株，合适孵育终浓度不同, 如CNE2为6mg/l，而CNE1为2mg/L。另外，侧群细胞的比例呈生长密度依赖性。CD133蛋白总含量恒定在0.1%~0.2%，侧群细胞和主群细胞表达量没有显著差异，CD133并不富集于侧群细胞中。而ABCG2蛋白，则侧群细胞较主群细胞优势表达，比例达80%以上。结论 鼻咽癌细胞株侧群细胞最佳的荧光染料染色时间为70 min，不同细胞株孵育终浓度不同。侧群细胞的比例呈密度依赖，与ABCG2密切相关，与CD133关系尚未明确，需进一步研究。 关键词：侧群细胞；主群细胞；肿瘤干细胞；流式细胞仪；Hoechst33342；鼻咽癌 中图分类号：R73-3 文章标识码 A Optimization of dyeing condition and determination of the surface markers on side population cells in the Nasopharyngeal Carcinoma cell lines JIAO Feng，QIU Ji-Hua， ZHANG Qian-Bin，YAO Kai-Tai，LIU Qiu-Zhen*(Cancer Institute,Southern Medical University, Guangzhou 510515, China) Abstract: Objective To investigate the optimum incubated concentrations and time of the fluorescent dyes Hoechst33342 for acquiring side population（SP）cells in Nasopharyngeal Carcinoma (NPC) cell lines and discuss the effects of cell density on proportion of the side population cells and determine the surface marker expression of CD133 and ABCG2 Methods NPC cell lines were incubated the fluorescent dyes Hoechst33342 in different time( 30，60，90，120，150，180 min),different concentrations and different cell density（70%, 100%）, fluorescein activated cell sorter (FACS) and inverted fluorescence microscope were employed to observe the changing of SP cells and choose the optimal incubated concentrations and time. Fluorescent antibody CD133 or ABCG2 were incubated with Hoechst33342.Using FACS, the expression CD133 and ABCG2 on the cell membrane was assayed. Results Hoechst33342 was incubated in 70 min that is best for obtaining the SP cells. Different cell lines need different incubated concentra