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课题1 菊花的组织培养 学习目标 1.说明植物组织培养的基本原理。 2.学习植物组织培养的基本技术。 3.进行菊花或其他植物的组织培养。 学习重点与难点 重点：1.植物组织培养的相关概念和过程 2.影响植物组织培养的因素 3.植物组织培养过程中使用的无菌技术。 难点：1.影响植物组织培养的因素。 2.植物组织培养过程中使用的无菌技术。 自主探究 植物组织培养的相关概念和基本过程 植物组织培养的相关概念 （1）细胞分化：植物的个体发育过程中，细胞在__________、__________和__________上都会出现稳定性的差异，形成这些差异的过程就叫做细胞分化。细胞分化是基因__________的结果。 （2）细胞的全能性：__________的植物细胞仍然具有发育成为__________的潜能。细胞全能性是组织培养的基本原理。 （3）愈伤组织：由离体的植物器官、组织或细胞在一定的培养条件下经过__________过程形成的组织，就叫愈伤组织，愈伤组织的细胞排列疏松而无规则，是一种__________的呈无定形状态的__________。 （4）脱分化：由__________的植物组织或细胞产生__________的过程，称为脱分化，又叫去分化。 （5）再分化：脱分化产生的愈伤组织继续进行培养，又可以重新分化成__________，这个过程叫做再分化。 （6）外植体：用于离体培养的植物器官或组织片段。 植物组织培养的基本过程 移植 ——→试管苗———→完整的植物体 影响植物组织培养的因素 1.内部因素：不同的植物组织，培养的难易程度差别很大。同种植物材料，__________ ，__________ 等也会影响实验结果。菊花的组织培养，一般选择 __________的茎上部新萌生的侧枝。 2.外部因素：（1）营养条件 常用的是__________ 培养基，其主要成分包括： __________，如_____________________________；__________ ，如______________________________ ；__________ 等。 （2）植物激素 植物激素中__________ 和__________ 是启动细胞分裂、脱分化和再分化的关键性因素。____________________、____________________ 以及__________ 等，都会影响实验结果。 （3）环境因素 __________ 、__________ 、 __________等条件也能影响植物组织培养。菊花组织培养，一般PH控制在 __________ ；温度控制在 __________ ；每天用日光灯照射__________小时。 【思考】(1)MS培养基中，各种营养成分各有什么作用？与微生物培养基的配方相比，有什么不同? (2)生长素使用的先后顺序、用量比例不同分别会造成哪些影响？ 三、实验操作过程 1.制备MS固体培养基 实验室一般使用4℃保存的配制好的培养基母液来制备 （1）配制各种母液。 配制母液时，大量元素浓缩__________ ，微量元素浓缩__________ 。常温保存。激素类、维生素类以及用量比较小的有机物可以按照1mg/ml的质量浓度单独配制母液。用母液配制培养基时，需要根据各种母液的浓缩倍数，计算用量。 （2）配制培养基。 配制1LMS培养基时，将称量好的琼脂加入800mL蒸馏水，加热熔化，然后加入蔗糖30g,依次加入母液，定容至1000mL。__________，然后分装到锥形瓶中，每瓶分装__________。 （3）灭菌。高压蒸汽灭菌 2、外植体消毒 选取菊花茎段时，要取 ____________________。 无菌技术包括培养基消毒灭菌和植物材料（外植体）的消毒灭菌。对培养材料进行表面灭菌时，一方面要考虑_______________；另一方面还要考虑植物材料的__________。不同药剂、不同植物材料，甚至不同器官要区别对待。一般情况下，细菌污染可能是由接种人员造成的，真菌污染可能是_________灭菌不当。 过程：流水冲洗→软刷刷洗→流水冲洗①过程 流水冲洗→软刷刷洗→流水冲洗__________→无菌吸水纸吸干外植体表面→体积分数为__________的酒精中摇动2～3次，持续__________→无菌水清洗→无菌吸水纸吸干外植体表面→质量分数为0.1﹪的__________溶液中1～2min→无菌水中至少清洗3次 3、接种 接种前，用体积分数70%的酒精将工作台擦拭，然后点燃酒精灯。所有的接种操作必须在酒精灯旁进行，并且每次使用器械后，都要用火