3基因表达调控（选修）.pptVIP

* 基因表达调节 南京农业大学 动物医学院基础兽医系动物生化教研室 医学分子生物学基础 第三章 基因表达调节 基因表达：是指基因的遗传信息经过转录、转译等极其复杂的生物化学反应，最终产生具有生物功能的蛋白质的过程，即DNA→RNA →蛋白质。 表达外源性目的基因的系统有原核和真核两大类。 一、基因表达的概念 第一节 原核细胞中的基因表达 基因表达的时间性及空间性 （一）时间特异性(temoral specificiti) 某一基因的表达严格按特定的时间顺序发生 （二）空间特异性(spatial specificiti) 在个体生长全过程，某种基因产物在个体按不同组织空间顺序出现 第一节 原核细胞中的基因表达 基因表达控制的潜在环节 复制水平 前体mRNA的转录 mRNA前体转录后的修饰和加工 mRNA从核内转移到胞液 mRNA的稳定性调节 mRNA的翻译活性调节 肽链翻译后的加工 肽链的转运和细胞定位 蛋白质的稳定性 第一节 原核细胞中的基因表达 二、原核生物基因表达的调节 原核基因表达的调节通过操纵子( operon)进行，操纵子是DNA上由几个相关的结构基因以及对其转录进行调节的启动基因和操纵基因等组成的单位。 第一节 原核细胞中的基因表达 阴性调控（negative control）—— 阻遏物蛋白（repressor ）对基因开关（操纵基因,O基因）进行的调节。阻遏物蛋白结合在操纵基因上则转录不能进行，它的活性受小分子诱导物影响。阻遏物是由调节基因i表达的。 阳性调控（positive control）—— 激活物蛋白（activator）对RNA聚合酶的转录进行的调节。激活物蛋白结合在启动基因(P基因)上游的某个区域以增强RNA聚合酶的转录活性，它的活性也受小分子的影响。 第一节 原核细胞中的基因表达 第一节 原核细胞中的基因表达 乳糖操纵子及其调控基因 具有Lac操纵子的大肠杆菌表达载体的最突出的特点是含有足够大的LacZ基因。 乳糖操纵子 第一节 原核细胞中的基因表达 乳糖操纵子的负调节 第一节 原核细胞中的基因表达 G和乳糖同时存在时，细菌优先利用G；缺乏G时，细胞中的cAMP水平有升高，与cAMP受体蛋白结合使之激活，乳糖操纵子的表达受到阳性调节。如果此时又有乳糖存在，则乳糖操纵子的表达既有阴性调节又有阳性调节。 乳糖操纵子的双向调节 乳糖操纵子 第一节 原核细胞中的基因表达 大肠杆菌乳糖操纵子控制区的结构 含有Lac203bp HaeⅢ片段的表达载体之构建 第一节 原核细胞中的基因表达 三、反义RNA的调节 反义RNA（antisense RNA）是指能与mRNA互补结合从而阻断mRNA翻译的RNA分子，它是反义基因（antisense gene）和/或基因的反义链（antisense strand）转录的产物，它对基因表达的调节是一种翻译水平的调节。 第二节 真核细胞中的基因表达 一、真核生物基因表达调控 真核生物基因表达的特点 细胞的全能性：是指同一种生物所有细胞都会有相同的DNA。 转录和翻译分开进行。 真核生物的基因表达较原核生物有许多不同。 真核生物大部分DNA是非裸露性的，由核膜包裹。 大多真核基因都有内含子。 真核生物重排某些DNA片段和扩增特定基因。 真核生物有3种不同的RNA聚合酶。 真核生物产生的mRNA分子寿命大多比原核生物长。 初级转录产物能进行剪接加工修饰。 不存在操纵于结构。 基因多拷贝。 第二节 真核细胞中的基因表达 真核生物基因表达及其调控元件 真核生物转录水平的调节 顺式作用元件：启动子(promotor)、增强子(enhancer)、沉默子(silencer)、 衰减子(debancer)和终止子(terminacer)等 启动子 一30bp区为富含有AT的典型TATA盒 第二节 真核细胞中的基因表达 增强子：是使启动子的基因转录效率显着提高(增强转录活性)的一类顺式作用元 件，其本身不具有启动子活性，是由多个独立的、具有特征性的核苷酸 序列所组成。 Structure of the enhancer of SV40 第二节 真核细胞中的基因表达 RNA剪接信号 负调控元件：沉默子和衰减于是抑制基因转录的DNA序列，称为负调控元件，它 们与反式作用因子相互结合而起作用。 终止子和polyA信号 一般认为PolyA的存在增加了mRNA分子的稳定性，使之能成功地进行翻译。 第二节 真核细胞中的基因表达 反式作用因子 反式作用因子有如下主要作用规律： 同一DNA序列可被