7第七章RNA的转录-1范例.pptVIP

第七章 RNA的 转录和转录后加工 第一节 RNA转录的概述第二节 原核生物RNA转录第三节 真核生物RNA转录第四节 转录的调控第五节 RNA转录的抑制作用第六节 RNA转录后的加工第七节 RNA降解、复制、编辑 中心法则 现代分子生物学的一个基本原理:基因作为唯一能够自主复制、永久存在的遗传单位，其生物学功能是以蛋白质的形式表达出来的。 DNA的序列是遗传信息的贮存者，它通过自主复制得到永存，并通过转录生成RNA、翻译形成蛋白质的过程来控制生命现象。 转录是拷贝一条与DNA链完全相同（除了T----U之外 ）的RNA单链的过程。 指导转录的链称为模板链，或负链（-链），又称反义链；对应的链称为正链（+链），编码链，又称有义链。 转录单位 转录的条件 1.酶：主要为DNA 指导的RNA聚合酶。 2.高能的底物：ATP、 GTP、CTP、UTP。 3.模板：以DNA一条称 为反义链为模板合成 RNA链。 4.启动子(promoter)和 终止子(terminator)。 转录过程 1. 转录的起始 DNA的解链、解旋 识别转录启动子 2. RNA链的延长 核心酶在模板链上滑行 3. 转录的终止 转录与复制的区别 从合成反应方面来说，转录与复制有相同点。但是，也存在以下主要不同点：?1. 转录中不需要RNA引物 ?2. 转录反应中, 转录泡内一般都只有一条 DNA链可以作为模板 3 . 底物（NTP）不同 4 . 酶不同 第二节 原核生物的RNA转录 一、细菌的RNA聚合酶 细菌的RNA聚合（DNA directed RNA polymerase）于20世纪60年代分离获得 全酶（holoenzyme）相对分子量为465000，至少有5个亚基和σ亚基组成，无σ亚基的酶称为核心酶（core enzyme）。 大肠杆菌RNA聚合酶的组成 The bacterial RNA polymerase 二、细菌RNA的转录 细菌的mRNA、rRNA、tRNA是由同一个RNA聚合酶所转录。 转录过程分为4个阶段： 1 识别模板 2 转录起始 3 RNA链沿伸 4 转录的终止 （一）识别 转录是从DNA分子的特定部位开始的，这个部位也是RNA聚合酶全酶结合的部位,这就是启动子。为什么RNA聚合酶能够仅在启动子处结合呢？ 什么是启动子? 启动子是RNA聚合酶识别、结合和开始转录的一段DNA序列，它含有RNA聚合酶特异性结合和转录起始所需要的保守序列。 对原核生物的100多个启动子的序列进行了比较后发现：在RNA转录起始点上游大约-10bp和-35bp处有两个保守的序列，在-10bp附近，有一组5‘-TATAAT-的序列，这是Pribnow首先发现的称为Pribnow框，RNA聚合酶就结合在此位上。 -35bp附近，有一组5’-TTGACA-的序列，已被证实与转录起始的辨认有关，是RNA聚合酶中的σ亚基识别并结合的位置。-35序列的重要性还在于在很大程度上决定了启动子的强度。 -10序列(Pribnow框)： 是转录的解链区 -35序列： σ亚基识别、结合所必需 大肠杆菌RNA聚合酶与启动子的结合分为两步： （1）酶找到启动子序列并与其以“关闭”复合体的形式（即双螺旋形式）相结合，这一步识别的是-35序列； （2）“关闭”复合体转为“开放”复合体（即双螺旋被解旋，两条链分开），此时酶与DNA是结合紧密； DNA开链是按照DNA模板序列正确引入核苷酸底物的必要条件。 启动子的分类 原核生物： RNA聚合酶可直接识别的启动子 真核生物 ： RNA聚合酶结合时需要有蛋白辅助因子，这类蛋白因子能识别与启动子序列相邻或甚至重叠的DNA序列。 （二 ）转录起始和延伸? 在开放性启动子复合物中起始位点和延长位点被相应的核苷酸前体充满，在RNA聚合酶β亚基催化下形成RNA的第一个磷酸二酸键。RNA合成的第一个核苷酸总有GTP或ATP，以GTP常见，之后σ因子从全酶解离下来，靠核心酶在DNA链上向下游滑动，而脱落的σ因子与另一个核心酶结合成全酶反复利用。 RNA合成过程 RNA链的合成方向也是5′→3′ RNA聚合酶沿着DNA链3′→5′方向移动 整个转录过程是由同一个RNA聚合酶来完成的一个连续不断的反应，转录本RNA生成后，暂时与DNA模板链形成DNA-RNA杂交体，长度约为8~12个碱基对，形成一个转录泡（见下图）。 转录速度大约是每秒钟30-50个核苷酸(nt)，但并不是以恒定速度进行的。 在电子显微镜下观察转录现象，可以看到同一DNA模板上，有长短不一的新合成的R