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LightCycler? 480 中文操作说明
罗氏医学仪器公司 / 应用科学部门
February 2008
目录
一. 启动机器与软件 3 二. 软件设定 --- 开启新实验 5 三. 样品编辑 9 四. 结果分析 12 五. 报告 18 六. 数据转移至其它计算机(数据输出与输入) 19 七. 使用者管理 19
一. 启动机器与软件
启动机器
机器主开关位于机器右后方。
机器正面两个警示灯代表机器状态。待警示灯 (右) 由闪烁橘色灯转变成稳定橘色灯,警示灯 (左) 由橘色转变成绿色 (约三分半钟),表示机器已经启动完成。
左警示灯 右警示灯 机器状态 橘 *闪烁* 橘 *闪烁* 正在初始化 绿 橘 机器启动完成
96/384孔盘还未放入 绿 橘 *闪烁* 96/384 孔盘正在放入中 绿 绿 机器启动完成
96/384 孔盘已经放入 绿 *闪烁* 绿 *闪烁* 实验进行中
按压机器正面上唯一的按钮,放入已经封膜完成之 96 或 384 孔盘。放置完成后,左右两警示灯都呈现绿色。
启动软件
开启计算机,并以正确的使用者名称与密码登入 Windows。
User name: OPERATOR
Password: LC480
开启 LightCycler 480 软件,并输入正确的使用者与密码。
二.软件设定-- 开启新实验
设定新实验
软件开启后,会进入主画面。点选 “New Experiment”。
出现实验设定窗口。任何时候需要回主画面的话,点选画面右边的按钮。
设定实验
若要套用设定好的实验步骤 (Template),请跳至 6.。
在实验设定画面上方,先选择适当的 Detection Format。选项包含:
另外可再点选 “Customize” 勾选所需的滤片组合。
输入反应体积: 96 well plate 范围为 10-100 ul,而 384 well plate 范围为 5-20 ul。
设定实验步骤 (Program)
设定 program,包含有 Pre-incubation, Amplification (PCR), Melting curve (optional) 与 Cooling。利用 『+』与 『-』增加或删除步骤。
设定循环数目 (Cycle) 与分析模式。通常 Amplification (PCR) program设定成 『Quantification』,而 Melting Curve program 设定成『Melting Curve』。
设定详细温度变化 (依照不同实验方法与设计而有所不同)
点选各个 program 即可设定详细温度变化步骤,请根据产品说明书来设定,利用 『+』与 『-』增加或删除步骤。需要设定的参数包含 Target (℃) 目标温度,Acquisition Mode (荧光侦测模式),Hold (hh:mm:ss) 停留时间。Ramp Rate (℃/s) 为升降温速度,范围如下:
Ramp Rate (℃/s) Heating up Cooling down 96-well Block 1.0 – 4.4 ℃/s 1.0 – 2.2 ℃/s 384-well Block 1.0 – 4.8 ℃/s 1.0 – 2.5 ℃/s
若设定温度低于 50℃,请把 Ramp Rate 调整成 1.5℃/s (96 well) 或 2.0℃/s (384 well)。
将实验步骤储存成 『Template』以便下次进行套用。点选左下角 “Save As Template” 即可把此步骤储存起来。
若要进行套用时,请直接点选窗口左下角 “Apply Template” ,选择欲套用之实验步骤即可。
设定完成后点选 “Start Run” 开始进行实验。
跳出档案储存窗口,请输入欲储存之文件名称。
实验进行中会进入另一个 Data窗口,窗口下方按键功能如下:
End Program : 结束此 Program, 进入下一个 Program。
+ 10 Cycles : 实时增加循环数目。
Abort Run: 马上结束此实验,请注意,若按此键,则此次实验的结果将不储存。
三.样品编
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