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wzy2基因RNA干扰遗传转化论文 【提示】本文仅提供摘要、关键词、篇名、目录等题录内容。为中国学术资源库知识代理，不涉版权。作者如有疑义，请联系版权单位或学校。 【摘要】干旱是限制农业生产的一个重要的环境因素，全球干旱、半干旱地区约占土地总面积的36%，占耕地面积的43%。我国干旱、半干旱地区面积约占全国土地面积的二分之一，主要分布于西北地区。小麦是主要粮食作物之一，干旱影响植物的生长发育，造成10%-20%的作物减产。因此，研究小麦的抗旱机理对粮食增产具有重要意义。脱水素是胚胎发育晚期积累的蛋白之一，属于热稳定的水溶性蛋白，它受寒冷、高温、干旱以及盐胁迫等逆境诱导，对保护生物代谢可能起到分子伴侣的作用，对细胞膜结构的稳定性起保护作用，从而减轻干旱对植物造成的伤害。wzy2基因是本实验室从水分胁迫的郑引1号小麦中克隆获得的新脱水素成员，但有关它在抗旱中的作用仍不清楚。RNA干扰技术具有高效性、特异性，在目的基因转录后可以沉默或剔除目的基因的表达，得到功能缺失性突变体，已经成为研究基因功能的有力工具。本研究利用RNA干扰原理，根据同源分析，在脱水素wzy2基因序列中选择了553-737bp之间的185bp的cDNA序列作为干扰片段，将克隆的干扰片段插入pKANNIBAL载体中，形成含有反向重复序列的中间载体PKANNIBAL-FR。再将反向重复序列的插入到含Ubi启动子的高效植物表达载体pAHC25的多克隆位点中。成功构建了含反向重复序列的RNA干扰表达载体pAHC-wzy2-Ri。以郑引1号小麦的幼胚为外植体，采用基因枪法轰击1500个幼胚的愈伤组织，获得再生植株103株，再生率为6.87%。利用表达载体上Bar基因的特异引物，对所获得103株T0代再生植株进行PCR分析，检测到16株Bar基因阳性植株，Bar基因阳性为1.01%。再经过反向重复序列的特异引物对所获得16株的Bar基因阳性植株进行PCR检测，获得3植转基因阳性植株，转化率为0.2%。收获3株转基因植株种子，取部分种植后获15株T1代植株，经PCR检测得到11株Bar基因阳性植株，其中2株T1代转基因植株干扰片段为阳性。为进一步研究脱水素wzy2基因功能奠定基础。 【关键词】小麦；wzy2基因；RNA干扰；遗传转化； 【篇名】小麦脱水素基因wzy2 RNA干扰表达载体的构建及遗传转化 【目录】小麦脱水素基因wzy2 RNA干扰表达载体的构建及遗传转化 摘要 6-7 ABSTRACT 7-8 第一章 文献综述 11-24 1.1 植物脱水素的研究概况 11-12 1.1.1 植物脱水素的国外研究概况 11-12 1.1.2 植物脱水素的国内研究概况 12 1.2 转基因技术在作物抗性研究中的应用现状 12-17 1.2.1 转基因技术在作物抗逆中的应用 13-14 1.2.2 转基因技术在作物抗病中的应用 14-15 1.2.3 转基因技术在作物抗虫中的应用 15-17 1.3 RNA 干扰在植物中的应用及研究进展 17-22 1.3.1 RNA 干扰的发现 17 1.3.2 RNA 干扰的作用机理及特点 17-19 1.3.3 RNA 干扰在植物功能基因组学的研究 19-21 1.3.4 RNA 干扰在植物抗性的研究 21 1.3.5 RNA 干扰在植物遗传改良的研究 21-22 1.4 本研究的目的和意义 22-24 第二章 小麦脱水素 wzy2 基因 RNA 干扰表达载体 pAHC-wzy2-Ri 的构建 24-34 2.1 材料与方法 24-31 2.1.1 材料 24-26 2.1.2 方法 26-31 2.2 结果与分析 31-33 2.2.1 小麦叶片总 RNA 的提取 31 2.2.2 正、反向序列的克隆 31 2.2.3 中间载体的构建与鉴定 31-32 2.2.4 RNA 干扰表达载体 pAHC-wzy2-Ri 的构建与鉴定 32-33 2.3 讨论 33-34 第三章 RNA 干扰表达载体 pAHC-wzy2-Ri 转化小麦植株的获得与鉴定 34-40 3.1 材料与方法 34-37 3.1.1 材料 34 3.1.2 方法 34-37 3.2 结果与分析 37-39 3.2.1 转化植株的获得 37 3.2.2 转化植株 T0代的 PCR 检测 37-38 3.2.3 部分 T1代转化植株的 PCR 检测 38-39 3.3 讨论 39-40 第四章 结论 40-41 参考文献 41-51 致谢 51-52 作者简介 52