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3. 对照品溶液修改为对照溶液 4. 头孢他啶聚合物项下，流动相A由原来的含3.5%硫酸铵的pH 7.0的0.01 mol.L-1磷酸盐缓冲液修订为含3.5%硫酸铵的pH 7.0的0.1 mol.L-1磷酸盐缓冲液. 四. 操作要点 （一）. 色谱条件中流动相A的组成与浓度.pH值及流速对测定结果的影响. 1. 流动相的组成与浓度：本方法流动相为磷酸盐缓冲液（磷酸二氢钠与磷酸氢二钠）. 用不同浓度的磷酸盐缓冲液作为流动相时，药物分子的色谱行为随缓冲液浓度的增加，其主峰的保留时间也随之增大。如头孢呋辛钠,选用pH7.0的0.1mol.L-1磷酸盐缓冲液和pH7.0的0.025mol.L-1磷酸盐缓冲液分别作为流动相A，均能得到良好分离，但在0.025mol.L-1磷酸盐缓冲液作为流动相A时.主峰流出较快.能有效缩短分析过程。 （附图） 头孢呋辛钠 又如阿莫西林，选用pH8.0的0.1mol.L-1磷酸盐缓冲液和pH8.0的0.05mol.L-1磷酸盐缓冲液分别作为流动相A，高分子聚合物与主峰均能达到良好分离，pH8.0的0.05mol.L-1磷酸盐缓冲液作为流动相A时，主峰流出为26分左右，较在0.1mol.L-1磷酸盐缓冲液中流出快.故采用0.05mol.L-1磷酸盐缓冲液作为流动相A 。（附图） 阿莫西林 表2 不同浓度磷酸盐缓冲液作为流动相A时的分离情况 头 孢 呋 辛 钠 流动相A 主峰流出时间 （分钟） 聚合物保留时间 （分钟） pH7.0 0.025mol.L-1磷酸盐缓冲液 ≈25 16.18 pH7.0 0.1mol.L-1磷酸盐缓冲液 ≈35 16.18 阿 莫 西 林 ? pH8.0 0.05mol.L-1磷酸盐缓冲液 ≈26 16.12 pH78.0 0.1mol.L-1磷酸盐缓冲液 ≈30 16.12 根据以上实验，本版药典对头孢他啶中流动相A的浓度进行了修订。原方法为流动相A为：含3.5%硫酸铵的pH7.0 的0.01 mol.L-1磷酸盐缓冲液，流速为每分钟1ml；由于主成分峰流出较快，与聚合物峰不易分开，故检不出聚合物。现修订为含3.5%硫酸铵的pH7.0 的0.1 mol.L-1磷酸盐缓冲液，流速为每分钟0.8ml，使主成分峰与聚合物峰间分离度达到要求，从而使聚合物得以检出。同时硫酸铵的加入也是非常重要，如不含硫酸铵时，则聚合物峰仍不能检出 . （附图） 头孢他啶 2. 流动相的pH值对聚合物检出的影响 相同浓度， pH不同,样品分离情况也不同。如阿莫西林.使用pH 7.0的0.05 mol.L-1磷酸盐缓冲液分析时，色谱图中无聚合物峰可检出，而改用pH 8.0的0.05 mol.L-1磷酸盐缓冲液作为流动相A时，则聚合物与主峰分离良好（附图） 阿莫西林 但也有的品种在分离时对流动相ApH值的要求范围较宽，pH值稍有波动不会影响结果。如：头孢匹罗，使用pH 7.0与pH 8.0的0.05 mol.L-1磷酸盐缓冲液分别作为流动相A时，色谱图基本一致。 3. 流速 调节流速可改变色谱峰的保留时间，已达到最佳分离效果 (二）. 有关对照溶液测定的几个注意点 已有实验证明，β-内酰胺类抗生素在特定的条件下，如水，0.01%SDS或0.5%葡萄糖溶液作为流动相B，可缔合成表观分子量极大的缔合物，缔合物在Sephadex G 10 凝胶色谱系统中色谱行为与高分子杂质一样，都在Kav=0流出，表现为单一色谱峰。利用这一特点，作为测定方法中的新的定量法—自身对照外标法。 但由于β-内酰胺类抗生素类抗生素的品种繁多，结构复杂，故在研究制定各品种方法学时，出现以下几个问题： 1.?有关对照溶液保留时间与蓝色葡聚糖2000峰保留时间不一致的问题 在高分子聚合物测定方法项下的系统适用性试验中规定：在两种流动相系统中蓝色葡聚糖2000峰的保留时间比值应在0.93～1.07之间，对照溶液主峰与供试品溶液中聚合物峰与相应色谱系统中蓝色葡聚糖2000峰的保留时间比值应为0.93～1.07之间。 * * 2005年版药典 β-内酰胺类抗生素 高分子聚合物修订情况简介 β－内酰胺类抗生素可引起人体的过敏反应。根据研究证明，其本身并不是致敏源，而是内酰胺开环后与具有活泼氨基的蛋白、糖类及多肽等大分子物质聚合（外源性杂质）或另一分子上的活泼氨基聚合而形成的高分子聚合物（内源性杂质）具有致敏性（且为非活性物质）。 因此控制β－内酰胺类抗生素中高分子聚合物的含量是有效降低过敏反应的关键。 一.前言 在不同结合位点产生的外源性杂质(青霉素噻唑蛋白、多肽） 仅母核参与的聚合反应青霉素类 头孢类 侧链参与的聚合反应青霉素类（氨苄青霉素） 活性成分与蛋白、糖类及多肽等大分子物质聚合一般只发生在合