DNA条形编码技术在昆虫学中的应用讲解.doc

DNA条形编码技术在昆虫学中的应用 摘要：DNA条形编码技术是分子生物学领域出现的一项新技术，其本质是一段含有生物信息的DNA片段，通过对这段基因片段的分析来实现对生物物种准确且快速的鉴定。本文主要针对DNA条形编码技术的产生、发展以及其在昆虫学中的基础研究与实践应用等方面进行综述。 关键字：DNA条形码；昆虫学；应用 Abstract:DNA barcoding is a new technology in the field of biological taxonomy. Its essence is a piece of DNA fragment containing biological information. It is a quick and accurate way to identify species by using the gene fragment. This article mainly aims at the production and development of DNA barcoding. Some aspects of insect taxonomy of basic research and practical application will be summarized as well. Key words:DNA barcoding;entomology;application 前 言 所有生物学研究的基础之一就是物种的准确鉴定。昆虫作为世界上物种数量最多的类群，其在分类上存在大量争议，虽已有达170多万个物种已被命名[1]，目前尚有存在着大量种类有待我们去发现、描述和命名，因此其分类任务复杂而艰巨。近几年，随着分子生物学技术的飞速发展，DNA条形编码技术的应运而生，它的提出实现了分类学上的一次质的飞跃，其本身具有简便、准确快速、易操作等优点使其被广泛应用在物种的分类工作中[2]。这不仅弥补了传统形态分类的诸多不足，还为提高昆虫物种鉴定效率、辅助发现和描述新种和隐种、系统发育研究、入侵物种检测与鉴定、法医昆虫上的应用以及保护昆虫物种资源多样性等提供了新的研究方法。本文综述了DNA条形编码技术的产生、发展以及其在昆虫学基础研究与实践应用等方面，旨在使人们对这项新技术有一个更加深入的了解。 1 DNA条形编码技术的产生 DNA条形编码技术，类似于商品条形码，在分类学研究领域人们采用生物体的某段DNA序列作为标记，以此来标识一个物种。这项技术即为DNA条形码（DNA barcoding）[3]。 21世纪初，德国进化生物学家Tautz教授首次提出，将DNA作为生物分类研究平台的观点[4]-[5]。随后，加拿大Hebert教授[6]提出了DNA barcoding的概念，即通过对线粒体DNA细胞色素C氧化酶亚基Ⅰ基因（mtDNA COⅠ）5’端一段长度约为650bp的基因片段进行测序和序列分析，进而在DNA水平上成功区分物种。他还提出线粒体COⅠ基因的序列可以作为物种的条形码，为全球所有生物进行编码，且认为利用COⅠ基因从分子演化的角度，将提供一种快速、方便且可信的分类方法。 2 DNA条形编码技术的原理和流程 2.1 DNA条形编码技术的原理 DNA barcoding本质就是一段DNA片段，这个片段具有的某些特点可以使其成为某一物种的分子标签，即人们以已知的一系列分类单元的DNA序列为参考，通过序列间相似度的评价来实现物种的鉴定[3]。在昆虫分类领域，DNA条形编码技术采用的标记基因主要是线粒体COⅠ基因，它之所以能作为鉴定的依据，是因为昆虫线粒体DNA是共价闭合的环状双链DNA分子，没有重组、倒位、易位等突变现象，组成相当稳定，严格遵循母系遗传[7]。而COⅠ基因是线粒体蛋白编码基因之一，密码子第三位碱基不受自然选择压力的影响，可以自由变异，且COⅠ的演化速率是其他蛋白编码基因的3倍，有足够的变异能够将物种区别开来，COⅠ还具有较少的插入和缺少，两端序列有相对的保守性的特点，是较好的分子标记，被众多学者在研究中使用。 2.2 DNA条形编码技术的流程 DNA barcoding的技术流程主要包括样品获取、DNA提取、PCR扩增、序列测定、序列比对及根据序列差异进行判别等几个方面，其简单的操作步骤如下图所示[3]。 3 DNA条形编码技术在昆虫分类中的应用 DNA片段作为不同分类水平的研究材料是很重要的，研究不同类群的亲缘关系，所需要选取的基因和碱基位点也不相同。通常进化快的基因和碱基位点适于亲缘关系较近类群的系统学研究，进化慢的则适于远源类群的系统学研究。下图为线粒体DNA基因序列各区域的应用范围[8]-[9]。 表1 线粒体DNA序列