X3-1-1DNA重组技术的基本工具试题.ppt

* pBR322是目前用得最多的一种人工构建质粒 * A C G T G C A G 标记基因 外源基因 A C G T G C A T * 抗四环素基因 四环素 生长被抑制 正常生活 四环素 重组DNA * 例、已知标记基因有抗四环素基因和抗氨苄青霉素的基因，现探讨某细菌的质粒中有无标记基因或标记基因是什么？请设计实验、预期实验结果，并得出相应的实验结论。 对照组：不添加抗生素 实验组1：添加一定浓度的四环素 实验组2：添加一定浓度的氨苄青霉素 实验组3：添加一定浓度的四环素和氨苄青霉素 * 对照组 实验组1 实验组2 实验组3 结 论 预期一 ＋ ＋ ＋ ＋ 预期二 ＋ ＋ － － 预期三 ＋ － ＋ － 预期四 ＋ － － － 对照组：不添加抗生素 实验组1：添加一定浓度的四环素 实验组2：添加一定浓度的氨苄青霉素 实验组3：添加一定浓度的四环素和氨苄青霉素 既含有抗四环素基因也含有抗氨苄青霉素基因 只含有抗四环素基因 只含有抗氨苄青霉素基因 既不含有抗四环素基因也不含有抗氨苄青霉素基因 * 重组DNA分子的模拟操作 注意：这两条DNA分子的碱基对不是随意乱写的。 首先，每个DNA分子上的两条链上的碱基要互补配对； 第二，每个DNA分子中每条链都存在一个G-A-A-T-T-C的碱基序列，也就是说是EcoRI限制酶的识别位点，并存在G-A的切割位点。 * 思考与探究 P7 2、为什么限制酶不剪切细菌本身的DNA？ 通过长期的进化，细菌中含有某种限制酶的细胞，其DNA分子中或者不具备这种限制酶的识别切割序列，或者通过甲基化酶将甲基转移到所识别序列的碱基上，使限制酶不能将其切开。这样，尽管细菌中含有某种限制酶也不会使自身的DNA被切断，并且可以防止外源DNA的入侵。 * 3、天然的DNA分子可以直接用做基因工程 载体吗？为什么？ 提示：基因工程中作为载体使用的DNA分子很多都是 质粒（plasmid），即独立于细菌拟核处染色 体DNA之外的一种可以自我复制、双链闭环的 裸露的DNA分子。 是否任何质粒都可以作为基因工程载体使用呢？ 不是 作为基因工程使用的载体必需满足以下条件： * 1）载体DNA必需有一个或多个限制酶的切割位点，以便目的基因可以插入到载体上去。这些供目的基因插入的限制酶的切点所处的位置，还必须是在质粒本身需要的基因片段之外，这样才不至于因目的基因的插入而失活。 2）载体DNA必需具备自我复制的能力，或整合到受体染色体DNA上随染色体DNA的复制而同步复制。 3）载体DNA必需带有标记基因，以便重组后进行重组子的筛选。 4）载体DNA必需是安全的，不会对受体细胞有害，或不能进入到除受体细胞外的其他生物细胞中去。 5）载体DNA分子大小应适合，以便提取和在体外进行操作，太大就不便操作。 实际上自然存在的质粒DNA分子并不完全具备上述条件，都要进行人工改造后才能用于基因工程操作。 * 4、DNA连接酶有连接单链DNA的本领吗？ 迄今为止，所发现的DNA连接酶都不具有连接单链DNA的能力，至于原因，现在还不清楚，也许将来会发现可以连接单链DNA的酶。 * 思考： 一、质粒是基因工程中最常用的运载体，它的主要特点是（ ） 1．能自我复制 2、不能自我复制 3、结构很小 4、成分是蛋白质 5、是环状DNA分子 6、是环状RNA分子 7、链状DNA分子 8、能友好地借居在宿主细胞中 二、质粒上会存在某些标记基因，这些标记基因有什么用途？ 1、3、5、8 便于筛选、识别 三、要想将某个特定基因与质粒相连，需要用几种限制性内切酶和几种DNA连接酶处理？ 为什么？ 一种 * 例1、以下是两种限制酶切割后形成的DNA片段，试分析： ①GC… ②AATTC… ③ …GC ④ …CTTAA CG… G… …CG …G (1)其中①和 是由一种限制酶切割形成的 末端，两者要重组成一个DNA 分子，所用DNA连接酶通常是 。 (2) 和 是由另一种限制酶切割形成的 末端，两者要形成重组DNA片段，所用的连接酶通常是 。 ③ 平 T4 DNA连接酶 ② ④ 黏性 E·coli DNA连接酶 * 例2、某科学家从细菌中分离出耐高温淀粉酶（Amy） 基因a,通过基因工程的方法，将a转到马铃薯植株中，经检测发现Amy在成熟块茎细胞