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版权所有 未经作者同意请勿使用 实验二 高压蒸汽灭菌技术 一、实验背景及目的： 高压蒸汽灭菌是一种较彻底的灭菌方法。微生物学实验中常用于培养基、使用过的实验材料等的灭菌。 灭菌及无菌操作是保证微生物学实验顺利进行的关键环节和基本操作技术。 1.了解高压蒸汽灭菌的基本原理和正确的操作方法； 2.正确的、较熟练的掌握高压蒸汽灭菌的操作步骤和方法，确保灭菌的效果和实验操作的安全。 二、基本原理： 高压蒸汽灭菌是利用专用高压蒸汽灭菌设备中纯的水蒸汽的高温（100℃以上）和穿透能力，来杀灭待灭菌物体内外的微生物的一种物理的灭菌措施。 高压蒸汽灭菌设备中的纯的水蒸汽的温度可达100℃以上，从而导致带灭菌物体内外的微生物细胞中的蛋白质、核酸等的不可逆变性，以杀灭微生物。 实验二 高压蒸汽灭菌技术 高压蒸汽灭菌设备主要由由较厚的锅体（其中的下部有加热元件）和套在锅体中的、放置待灭菌物品的内桶、锅盖及各种阀门、压力表等构成。 高压蒸汽灭菌实际上是利用纯的水蒸汽在密闭容器形成高的压力来提高纯蒸汽的温度达到灭菌的目的的。 实验二 高压蒸汽灭菌技术 混有空气的水蒸气，在同等的压力下，其温度远低于纯的水蒸汽的温度，在此情况下，灭菌效果无法保证。所以，在进行高压蒸汽灭菌时，必须先利用加热水产生的蒸汽将高压蒸汽灭菌设备中的空气完全排除后，再关闭放汽阀门，形成密闭条件，提高纯蒸汽的温度，确保灭菌效果。 同时，须严格遵守操作规程，确保安全。 实验二 高压蒸汽灭菌技术 三、实验材料和设备： 1. 待灭菌培养基及其他物品； 2. 手提式小型高压蒸汽灭菌器，自动高压蒸汽灭菌器； 实验二 高压蒸汽灭菌技术 四、实验步骤： 1. 检查灭菌设备的状况，电源连接，放汽、安全阀门，密封胶圈等是否正常； 2. 向锅体中加水：使锅体中的加热元件浸入水中，以防烧毁； 3. 将待灭菌物品的放入内桶，物品间应留有一些空隙，不宜太过拥挤，并将内桶正确地置于锅体中； 实验二 高压蒸汽灭菌技术 4. 关闭锅盖，手提式小型高压蒸汽灭菌器应将放汽阀连带的排气软管，插到内桶桶壁旁的排气通道中；以对角方式拧紧固定螺栓，同时打开放汽阀，接通热源，加热；自动高压蒸汽灭菌器应设置好相应的灭菌条件； 5. 手提式小型高压蒸汽灭菌器需待放汽阀开始排汽5分钟后，方可关闭，使其密闭；自动高压蒸汽灭菌器有专用、自动放汽阀，可自动调控，一般不需调整； 实验二 高压蒸汽灭菌技术 6. 继续加热，当手提式小型高压蒸汽灭菌器锅盖上的压力表显示所需压力时，调整热源，维持压力、温度，在选定的温度下一般需维持20～30分钟；自动高压蒸汽灭菌器可根据设定自动维持压力、温度和时间等； 7. 灭菌结束后，即维持一定时间后，关闭电源，待灭菌锅自然降温、降压，直至表头压力回零，方可打开放汽阀，排汽，再打开锅盖，取出已灭菌物品； 8. 灭菌培养基冷却，经灭菌效果检验合格后，妥善存放，待用。 实验二 高压蒸汽灭菌技术 五、实验结果： 1. 记录高压蒸汽灭菌操作的要点； 2. 手提式小型高压蒸汽灭菌器锅盖上的阀门和压力表各有何作用？ 实验二 高压蒸汽灭菌技术 * * 版权所有 未经作者同意 请勿使用 版权所有 未经作者同意 请勿使用 实验二 高压蒸汽灭菌技术 版权所有 未经作者同意 请勿使用 版权所有 未经作者同意 请勿使用 版权所有 未经作者同意 请勿使用 版权所有 未经作者同意 请勿使用 版权所有 未经作者同意 请勿使用 版权所有 未经作者同意 请勿使用 版权所有 未经作者同意 请勿使用 *