免疫组织化学技术及应用2.ppt

免疫组织化学技术及应用前言  医学的目的是解除人体的病痛，其核心是疾病的诊断和治疗两个环节，而这两个环节的关系可以明确为：任何疾病的有效治疗均来源于正确的诊断。在当今医学发展的现状下，虽然疾病的诊断手段有几十种之多，但就其准确性来说，首推病理诊断准确性高，即病理组织学诊断要比化验、放射、核素等任何一种诊断方法更准确、更可信、更有权威性。而在病理诊断的大家族中，免疫组织化学（简称免疫组化）已成为其中的一种常有手段。  我们从以下几个方面来介绍： 概述 免疫组化的理论和技术 免疫组化结果判断 免疫组化应用 常用抗体介绍 概 述 一、概念： 免疫组织化学（immunohistochemistry），或免疫细胞化学(immunocytochemistry)，是利用抗原抗体反应来定位、定量研究组织和细胞中的某种化学成份的技术, 是免疫学和传统的组织化学互相结合而发展起来的，也可以说是原位免疫学（in situ immunology） 三、IHC的优点 定位（in situ）准 特异性（specificity）强 灵敏度（sensitivity）高 形态学改变与功能和代谢结合 多重标记和定量分析 可用存档的蜡块，回顾性研究 免疫组化的理论和技术 一、基本原理 抗原（antigen）是一种化学物质 →免疫系统→ 相应的抗体（antibody），并能在体内和体外特异性结合 →抗原-抗体复合物。机体的免疫活性淋巴细胞在抗原的刺激下成为致敏淋巴细胞，进而分化、增殖为记忆细胞和淋巴母细胞，后者再分化为浆细胞，产生和分泌相应的抗体。 二、抗原和抗体： （一）抗原 ： 1、抗原的概念 进入机体后凡能刺激机体产生抗体（antibody, Ab），并能与相应的抗体发生特异性结合的物质成为抗原（antigen，Ag） 物质的这种特性称为抗原性（antigenicity） 抗原决定簇（antigen determinant, Epitope）：决定抗体的特异性的位于抗原分子表面的一些特殊的化学结构和空间构型 抗原的抗原性 免疫原性，指抗原进入机体后能刺激免疫系统产生生成抗体 反应原性，即能与相应的抗体发生特异性的结合 具有免疫原性和反应原性的物质，叫做完全抗原 只有反应原性而不具备免疫原性的物质叫做半抗原（hapten） 抗原不单指能引起抗体生成的物质，还包括能引起免疫系统的T淋巴细胞致敏产生淋巴因子，并能与相应的淋巴因子反应的物质 目前对于抗原的定义为：能刺激机体的免疫系统产生免疫应答，即产生抗体或致敏淋巴细胞，并能与相应抗体或致敏淋巴细胞在体内或体外发生特异性结合的物质 2、抗原的性质： 按照来源的不同，抗原可分为： 细胞结构抗原，包括：细胞膜成份，如桥粒蛋白；细胞器，如角蛋白等 细胞分泌物，如黏液、激素等 沉积抗原，如免疫球蛋白 入侵抗原:如细菌、病毒、药物、异物等. 按照物理性质和抽提方法的不同， 抗原又可分为： 可溶性抗原：蛋白质属于可溶性抗原 颗粒性抗原：细胞结构成份、细菌、病毒等属于颗粒性抗原 颗粒性抗原一般具有较可溶性抗原更强的免疫原性 3、抗原的保存 如何保存抗原的反应原性，使得Ag-Ab反应能顺利进行，十分重要 组织取材后，为防止细胞自溶，减少抗原的扩散与失活，一般采取两种方法：及时液氮低温保存，或液氮速冻后低温冰箱保存。在此后的切片、干燥和染色过程中，均应当注意温度不要高于40℃ 固定, 一般用10%的缓冲福尔马林固定, 在此后的浸蜡、包埋、切片和染色过程中, 温度不宜超过60℃ （二）抗体 1、抗体概念： 抗体（antibody，Ab）是机体受抗原刺激后，由B细胞及其衍生物（浆细胞）分泌的一类能与相应抗原 特异结合的球蛋白，称为免疫球蛋白（immunoglo- bulin, Ig） 2、抗体的基本结构 人类的Ig有五类，即IgG、IgA、IgM、IgD和IgE Ig的基本结构是相似的，是由两条相同的重链（Heavy chian, H）和两条相同的轻链（Light chain, L）组成的大分子蛋白质 可变区（Variable region, V） 恒定区（Constant region, C） 值得注意的是一个抗体分子有两个相同的V区，因此一个抗体分子有两个抗原结合部位（双价） 3、抗体的分类 抗体可分为多克隆（polyc