中草药提取物复方制剂体外抑杀眼部蠕形螨作用的材料.docVIP

30种中草药提取物体外抑杀眼部蠕形螨的研究 蠕形螨(Demodex)是一种小型寄生螨类，属于节肢动物门、蛛形纲、真螨目、蠕形螨科。自然界存在种类和数量众多的蠕形螨，只有两个种类发现寄居于人体，即毛囊蠕形螨和皮脂蠕形螨[1]。在眼部，毛囊蠕形螨寄居于睫毛毛囊，而皮脂蠕形螨则寄居于睫毛皮脂腺和睑板腺[2]。蠕形螨睑缘炎表现为睑缘及结膜充血，干涩不适，痒，异物感等。病情反复发作，难彻底治愈，因而人们不断研究探索治疗蠕形螨睑缘炎的有效方案。既往，治疗蠕形螨睑缘炎的药物主要有甲硝唑、金霉素眼膏、匹鲁卡品眼膏等[3,4,5]，但容易复发，疗程长，效果不尽人意。近年，Gao YY进行的体外杀虫试验发现以往报道的这些药剂对眼部蠕形螨体外的杀虫效果不良，而茶树油具有很好的体外杀虫效果，并呈浓度依赖型[6]，并已报道应用于临床[7]，对蠕形螨引起的眼部炎症和不适有很好的效果。然而，茶树油的不足之处为它有比较明显的眼部刺激征，因而我们致力找寻一种既能有效杀螨而又刺激性小的药物。中草药作为传统药物的组成部分，在预防、治疗各种疾病特别是西药很难治愈的疑难杂症方面的优势已获得世界的广泛认同，对面部蠕形螨的治疗方案也取得显著疗效。我们对30种中草药分别采用80％乙醇热回流法对其杀睫毛蠕形螨活性进行筛选，发现丁香、苍耳子等具有较显著的杀灭眼部蠕形螨的活性。 ? 1材料 1．1供试药物 查阅《中药大辞典》、《全国中草药汇编》等有关书籍和文献资料，选择具有驱杀体内外寄生虫作用的中草药，及国内外期刊里出现的具有杀虫、杀螨活性的中草药，并从中挑选出30种刺激性较小的供于试验：艾叶、百部、白花丹、槟榔、白鲜皮、陈皮、大风子、地肤子、丁香、大风子、黄柏、苦参、蒲公英、蛇床子、使君子、仙鹤草、茵陈、芫花、栀子、青蒿、荆芥、五倍子、麝香、佛手柑、白芷、朱砂、打破碗花花、苍耳子、苦楝皮、贯众。（所有药物均购自福建医科大学附属二院） 1．2 主要仪器 双目光学显微镜 （OLYMPUS），电热套 (PTHW，河南豫华仪器有限公司），?????????????????? 不锈钢电热蒸馏水器（上海路达实验仪器有限公司），高速中药粉碎机（HX-100，浙江省永康市溪岸五金药具厂），数显恒温水浴锅（江苏省金坛市江南仪器厂），循环水式真空泵（SHZ-D（III），河南省巩义市予华仪器有限责任公司），架盘药物天平（0g－500g，上海医疗器械八厂），可调式移液器（上海雷勃分析仪器有限公司）。其他耗材：铁架台、球形冷凝管、抽滤瓶、布式漏斗、磨口圆底烧瓶、温度计、真空弯管、胶管、定性滤纸、载玻片、盖玻片、乙醇等。 2?方法 2．1 提取物的制备 将中药材清洗、干燥、粉碎，称取药材粉末20g，置500mL 圆底烧瓶内，加80％乙醇 200mL，室温浸泡12小时，85℃水浴热回流提取 2 次，首次 60分钟，第2次30分钟，合并提取液，放冷后真空抽滤，减压回收乙醇至无醇味，得到中药材乙醇提取物，定容成0.5g/ml。 2．2 体外杀螨试验 我们经过大量的睫毛采样镜检，发现上睑蠕形螨的阳性率高于下睑，据报道，眼部蠕形螨高发于具有圆柱状鳞屑的睫毛[8]，故采样时统一拔取上睑睫毛和采选带有圆柱状鳞屑或颜色异常、可疑蠕形螨寄居的睫毛，每上睑拔4根，共8根，将拔下的睫毛置于载玻片上，观察是否有蠕形螨存在。眼部蠕形螨在睫毛拔出后部分虫体呈游离状态，部分虫体不同程度埋在睫毛的圆柱状鳞屑中[6]，使虫体不能有效接触药液，故本试验仅计数滴入药剂后游离的蠕形螨。在确认有蠕形螨的睫毛上，盖上盖玻片，将 20 ul 待测药液缓慢滴于盖玻片的侧缘，药液缓慢向对侧扩散，显微镜下观察蠕形螨的活动情况，直至螨虫死亡。由于幼虫离开人体后很快死亡，故受试螨虫均选取活力好的成虫作为试验对象，成虫和幼虫的区别为：成虫为短棒状，有4对发育良好的足，幼虫体形瘦长，尾部尖削，可见3－4对发育不良的足（图一）。 蠕形螨死亡判定标准：虫体肢节持续 2min 不动，用解剖针刺激仍无复苏现象或虫体体表皱缩、变色、变形、内含物外泻等。 3?结果 3．1 中草药筛选 杀螨效果较好的中草药是:丁香、苍耳子、蒲公英、苦楝皮、使君子、艾叶、芫花、黄柏、苦参、荆芥、百部等，均能在30分钟之内杀灭睫毛蠕形螨。阴性对照组生理盐水观察150分钟仍未见螨虫死亡（表一）。（统计结果采用均数±标准差） 该研究首次发现了苍耳子具有较显著的杀螨效果，金银花也显示出了一定的杀螨效果（55分钟）。 表一??? 中草药对睫毛蠕形螨的体外杀虫试验结果 中草药 活螨数目（只） 螨死亡时间（分钟） 中草药 活螨数目（只） 螨死亡时间（分钟） 丁香 15 6.33±1.75 贯众 15 52.93±3.28 苍耳子 15 12.47±1.41 金银花 15 55.07±3.45 蒲公英