双向电泳实验步骤.pptVIP

双向电泳 双向电泳 一、双向电泳原理 二、双向电泳样本制备 三、第一向电泳—IEF电泳 四、胶条平衡 五、第二向电泳—SDS六、双向电泳凝胶染色 七、双向电泳图片分析 双向电泳 一、双向电泳原理 双向电泳(Two-dimensional electrophoresis)的基本原理是基于蛋白质的等电点（pI)和分子量(Mr)不同而分离蛋白质：第一向电泳——等电聚焦（Isoelectric Focusing，IEF）根据蛋白质的等电点不同将蛋白质分离，第二向电泳——十二烷基硫酸钠—聚丙烯酰胺凝胶电泳（Sodium Dodecyl Sulfate-Polyacrylamide Gel Electrophoresis, SDS—PAGE）利用蛋白质的分子量大小不同将蛋白质分离。 双向电泳一次可以从细胞、组织或其它生物样本中分离上千种蛋白质，凝胶上的斑点都对应着样品中的蛋白质，且各种蛋白质的等电点，分子量和含量的信息都能通过质谱鉴定和软件分析获得。因此其在蛋白质组分析、疾病标志物检测、细胞差异分析、药物开发、癌症研究等领域都得到了广泛的应用。 二、双向电泳样本制备 二、双向电泳样本制备—动物样本 二、双向电泳样本制备—植物样本 二、双向电泳样本制备—植物样本 三、第一项电泳—IEF电泳 1：蛋白质定量,根据定量所得的数据吸取相应量的蛋白质，分析胶的一般上样量为银染120μg，考染