微生物代谢控制发酵（第三章）.pptVIP

微生物代谢控制发酵 王 腾 飞 wangtengfei1981@163.com第三章 微生物代谢控制发酵 第一节 代谢控制发酵的基本思路 第二节 微生物代谢控制发酵的措施 第三节 环境条件的控制 第一节 代谢控制发酵的基本思路 应用营养缺陷型突变株切断代谢支路； 渗漏突变株的应用； 抗结构类似物突变株的应用； 营养缺陷型回复突变株的应用； 增加前体物质的合成； 增加细胞渗透性，去除细胞内的终产物； 一些特殊调节机制的利用； 条件突变株的应用；选育不生成副产物的菌株。 代谢控制发酵工程能否获得成功，目的产物产量的高低，取决于微生物细胞自我调节控制是否能够解除或解除的程度。 能否解除微生物的自我调节控制机制，而使代谢产物大量积累是代谢控制发酵育种的关键。 1微生物终端产物:乳酸、酒精、CO2、乙酸、丙酮丁醇、酵母等。 2微生物生长自身必须的产物，如，糖化酶、蛋白酶、果胶酶等。 3微生物的次级代谢产物，如抗生素等 4素材性中间代谢产物，如，氨基酸、核苷酸、有机酸、核糖、乙酰辅酶A等，获得这些物质必须在遗传水平上打破微生物自身的代谢调节机制. 5微生物自身不能合成，自身也不需要的外源基因产物。 相关的常用名词 营养(nurture)：生物体获得的或合成的营养素。 基本培养基（minimal medium）: 野生型菌株（原养型）可以生长而该菌株的一切营养缺陷型均不能生长的培养基。 完全培养基（Complete medium）: 所含有的营养成分足以供给原养型和营养缺陷型菌株的生长的培养基。常用于菌种的选育和微生物遗传学研究等。 加富培养基，enriched medium: 又称富集培养基。一般为在普通培养基中加入额外的营养物质的培养基。加入的额外营养物质诸如血、血清、动植物或微生物细胞的提取物等营养丰富物质。常用于菌种筛选中，使所筛选的微生物在其中生长比其它微生物迅速而淘汰掉其他微生物。 结构类似物 与代谢途径中的代谢产物结构相类似，能与代谢物一样与调节酶结合引起酶活性的变化，但不具有代谢物生理功能的一类化合物。 营养缺陷突变株(Auxotroph) 指原菌株由于发生基因突变，致使合成途径中某一步骤发生缺陷，从而丧失了合成某些物质的能力，必须在培养基中补加该营养物质才能生长的突变型菌株。 渗漏型突变株 指遗传性障碍不完全的缺陷型。由于这种突变是它的某一种酶的活性下降而不是完全丧失，因此，渗漏缺陷型能够少量地合成某一代谢最终产物，能在基本培养基上进行少量的生长 代谢互锁 Metabolic interlock 一种代谢产物的代谢调节，受来自另外一种从生物合成途径来看似乎完全无关的终产物的控制，这种现象叫代谢互锁 （一）、切（阻）断支路代谢 措施： 选育营养缺陷突变株 选育渗漏缺陷突变株 1、营养缺陷菌株的应用 ①合成途径中某一步骤发生缺陷，致使终产物不能积累 ②实质上（遗传性的）解除了终产物的反馈抑制或反馈阻遏 ③中间产物或另一分支途径的末端产物得以积累 ④对某一产物的积累，起到节约碳源的作用 需要添加缺失的该物质才能在基本培养基上生长 营养缺陷型应用举例 （一） 5，-肌苷酸二钠（IMP)5，-肌苷酸二钠又名肌苷酸钠，简称5‘-IMP，为白色结晶或结晶性粉末，含有约7.5分子结晶水。无臭，有特别强的鲜味。 枯草芽胞杆菌嘌呤核苷酸生物合成的调节机制 在枯草芽胞杆菌的嘌呤核苷酸生物合成中，有几个部位受到产物的反馈调节，催化这些步骤的酶都是变构酶。 PRPP合成5/-磷酸核糖胺途径中的酶受AMP、GMP的反馈抑制，并且二者在抑制该酶活性中有互相增效的作用。 IMP是AMP、GMP合成途径的分支点，分别接受AMP和GMP的反馈调节。即在AMP合成中，专一性酶腺苷琥珀酸合成酶（SAMP合成酶）仅受AMP系物质的反馈阻遏；在GMP合成中，专一性酶（IMP脱氢酶）仅受GMP系物质的反馈阻遏和反馈抑制。 枯草芽胞杆菌嘌呤核苷酸生物合成的调节机制 肌苷酸发酵 腺嘌呤缺陷型（Ade-） 黄嘌呤缺陷型（Xan-） 鸟嘌呤缺陷型（Gua-） 当选用腺嘌呤缺陷型（Ade-）时，由于切断了IMP到AMP这条代谢支路，通过在培养基中限量控制腺嘌呤的含量，就可以解除腺嘌呤系化合物对PRPP转酰氨酶的反馈调节，因而可使肌苷酸得到积累。 在腺嘌呤缺陷型（Ade-）的基础上，若再诱变得到黄嘌呤缺陷型（Xan-）或鸟嘌呤缺陷型（Gua-），就可以切断IMP到GMP代谢支路，通过在培养基中限量控制黄嘌呤或鸟嘌呤的含量，就可以解除鸟嘌呤系化合物引起的反馈调节，从而增加肌苷酸的积累。 营养缺陷型应用举例 （二