蛋白质组复习.docVIP

1、蛋白质组学（Proteomics） 蛋白组学Proteomics的定义： 利用高分辨的蛋白分离技术和高效的蛋白鉴定技术，全景全息式地研究在各种特定情况下的蛋白质谱及其变化规律，包括细胞内动态变化的蛋白质谱的组成成份、表达水平、修饰状态和蛋白质之间的相互作用等，以揭示蛋白质功能及其与生命活动的关系，即在蛋白质水平上整体性、动态和定量地研究生物体。 蛋白质组proteome==Protein + genome 蛋白质 基因组 意即：基因组表达的全部蛋白质 蛋白组的两大特性 一：具有整体性 一个genome/cell/tissue/organism表达的全部蛋白质构成的整体，不是一个或数个蛋白质。 二：具有动态性 即蛋白质组是空间和时间上动态变化着的整体 Proteome 与Genome差别 Proteome 与Genome的联系 1）中心法则 2）相辅相成 3）同属系统生物学范畴 Proteome 与Genome的差别 基因组：相对稳定，包括数目和结构 蛋白质组：多样、复杂，使生命呈丰富多彩的表型 蛋白质组学的研究流程 基本线路：制备组织、细胞等蛋白质样品，然后大模分离、分析和鉴定 1） 确定研究对象 2） 采用哪些分级分离技术 3） 如果鉴定 蛋白质 4） 利用蛋白质 生物信息学 蛋白质组学的研究意义 ?蛋白质是生理功能的执行者，是生命现象的直接体现者，对蛋白质结构和功能研究将直接阐明生命在生理或病理条件下的变化机制。 ?几乎所有的生理和病理过程，以及药物和环境因子的作用都依赖于蛋白质，并引起蛋白质的变化。反之，对蛋白质组变化的分析也能提供对上述过程或结果的重要信息。 ?蛋白质组学的研究手段也可以应用于农业研究、环境保护等多方面。 ?蛋白质组研究不仅可实现与基因组的对接与确认，直接揭示生命活动规律和本质、人类重大疾患（病原体）致病的物质基础以及发生与发展的病理机制； ?而且可广泛推动生命科学基础学科以及分析、信息、材料等应用科学的发展； 第二部分 1、双向电泳原理 2-DE 蛋白质分子在溶液中由于其末端氨基、末端羧基及侧链的游离基团而成为带电颗粒，并可在电场内移动，其移动方向取决于蛋白质分子所带静电荷。不同蛋白质分子根据其氨基酸组成及所在溶液的pH值，携带的静电荷不尽相同，致使它们在电场中的迁移率各异，从而达到分理的目的。 双向电泳具体步骤 ?样品制备 ?IPG胶条重泡涨及上样 ?第一向：IEF ?IPG条平衡 ?平衡缓冲液Ⅰ(还原) ?平衡缓冲液Ⅱ(巯烷基化) ?第二向：SDS ?胶条染色 ?成像及图像分析 高效液相色谱法(HPLC) 色谱法分离原理 当流动相中所携带的混合物流过固定相时就会和固定相发生作用(力的作用)。由于混合物中各组分在性质和结构上有差异，与固定相发生作用的大小也有差异。因此在同一推动力作用下，不同组分在固定相中的滞留时间有长有短，从而按先后不同的次序从固定相中流出。高效液相色谱法(HPLC)是在20世纪60年代末，以经典液相色谱为基础，引入了气相色谱的理 论，在技术上采用了高效固定相、高压输液系统和高灵敏度的在线检测器，从而发展起来的一种新型分离分析技术。随着科学和技术的不断改进与发展，目前已成为应用极为重要、广泛的分离分析手段。 HPLC的分类 ?化合物的极性、电荷、分子大小、旋光性四种主要的性质可以用来产生高效液相色谱分离 按固定相分类：液液色谱法LLC；液固色谱法LSC 按分离机理分类：分配色谱法；吸附色谱法；离子交换色谱法；分子排阻色谱法；化学键合色谱法；亲合色谱法；胶束色谱法 结构 高效液相色谱仪由五大部分组成：高压输液系统、进样系统、分离系统、检测系统和色谱工作站 HPLC的应用 在生物化学和生物工程中的应用 1）氨基酸、多肽和蛋白质的分析研究 2）核碱、核苷、核苷酸和核酸的分析研究 3）生物胺的分析研究 在医药研究中的应用 在食品分析中的应用 在环境污染分析中的应用 在精细化工分析中的应用 毛细管电泳 CE 基本原理 电泳：带电粒子在电场作用下迁移 电渗：溶剂在电场作用下的单向流动 ?正溶质离子所受的力：电场力+ 电渗力 ?负溶质离子所受的力：电场力? 电渗力 ?中性分子所受的力：电渗力 分类 ?毛细管区带电泳（CZE） ?毛细管凝胶电泳（CGE） ?胶束电动毛细管色谱（MECC） ?毛细管离子分析（CIA） ?毛细管等点聚焦（CIEF） ?毛细管等速电泳（CITP） ?毛细管电色谱（CEC） 第三章 1、生物芯片（biochip）的概念 生物芯片（Biochip）是指通过机器人自动印迹或光引导化学合成技术在硅片、玻璃、凝胶或尼龙膜上制造的生物分子微阵列，根据分子间的特异性相互作用的原理，将生命科学领域中不连续的分析过程集成于芯片表面，以实现