第六章微生物代谢调控育种(4-29)课题.ppt

第8章 推理育种 8.1 微生物代谢 8.1.1、次级代谢产物与次级代谢调节 1.初级代谢和次级代谢 初级代谢：与生物生存有关的，涉及能量产生和能量消 耗的代谢类型。 生存必需；始终生产；不同种，相同；环境敏感性小； 酶专一。 次级代谢：某些生物为避免某种代谢物积累造成不利作 用而产生的一类有利生存的代谢。 根据其作用，可将其分为抗生素、激素、生物碱、毒素及维生素色素等类型。 并非必需，但有一定价值；某一时产；不同种，不同； 受环境敏影响大；酶专一性不强。 8.2 微生物代谢调节 8.2.1 次级代谢的调节机制 8.2.1.1分解代谢中酶合成的调节 1、酶合成的调节 诱导 阻遏 2、酶活性的调节 直线式代谢途径中的反馈抑制； 分支代谢途径中的反馈抑制： 优先合成、协同反 馈抑制、合作反馈抑制、 累积反馈抑制、同工酶调节、顺序反馈抑制 8.2.1 次级代谢的调节类型 ①酶合成的诱导调节 有些酶也是诱导酶，以底物或底物类似物（内 源、外源）为诱导剂。 ②反馈调节 次级代谢物的自身反馈抑制和反馈阻遏 末端产物反馈调节；生产能力与抑制浓度正相关。 分解代谢产物的调节 葡萄糖等一些碳、氮源及代谢产物有反馈抑制、阻遏作用。 初级代谢产物的调节； A有共用合成途径，反馈抑制；B初产物参与次合成，自反馈而影响。 磷酸盐调节； A抑制酶的作用；B导致细胞能荷变化；C竞争某些金属离子的作用。 8.1.2 初级代谢产物与次级代谢 一般认为，次级代谢指微生物在一定生长时期，以初级代谢产物为前体，合成一些对微生物生命活动无明确功能的物质的过程，即为次级代谢产物。 次级代谢与初级代谢关系密切，初级代谢的关键性中间产物往往是次级代谢的前体，如，糖降解过程中的乙酰CoA是合成四环素、红霉素的前体； 组成酶变异株的筛选? 许多水解酶是诱导酶，只有在含有底物或底物类似物的培养环境中，微生物才会合成这些酶类，所以，诱导酶的生产不仅需要诱导物，而且受到诱导物的种类、数量以及分解产物的影响。 具体的筛选方法有恒化器法、循环培养法和诱导抑制物法。 1)?恒化器法：常被用于微生物的“驯化”。在培养基中添加不能起诱导作用的低浓度底物，菌生长速率极慢，而群体中少数组成型变异株则可合成有关的酶，分解利用该底物，生长速率较快。 为了提高组成酶变异株的优势，即它在群体中的比例，可以应用恒化器培养技术。随着恒化器培养中不断加入新鲜基质而逐渐增大组成酶变异株的优势，这样就能够比较容易地做进一步的纯化分离。? 2)?循环培养法：利用不含诱导物的培养环境和含有诱导物的培养环境进行交替循环培养待分离的菌悬液，从而使组成酶变异株得到富集。 当接种到不含诱导物而含有其它可利用碳源的培养基中时，两种类型菌株同样能较好地生长，但在此环境中组成型突变株已能合成有关的水解酶，而诱导型菌株就不能合成。 ? 将它们转接入含诱导物的培养基中时，变异株能迅速利用诱导底物进行生长繁殖，而诱导型出发菌株需经历一个诱导合成酶的阶段，两类菌株的生长就不同步，组成酶变异株所占的比例将逐渐增大。 ３、组成型突变株筛选 诱导型依赖诱导物。组成型不依赖诱导物。 突变发生在调节基因或操纵基因,解除对诱导物的依赖,可获组成型突变株。 筛选方法：设计条件使组成型优势生长，或通过菌落分辨。 　　 ①加诱导酶合成抑制物 　　　②交替培养法 　　　③显色反应法 筛选方法 ①加诱导酶合成抑制物 如：加邻硝基-β-D-岩藻糖苷，抑制-β半乳糖苷酶合成。 诱导型不能利用乳糖，不长；组成型产酶，能利用乳糖，生长，被富集。 ②交替培养法 含诱导物（乳糖）中培养——组成型快——不含诱导 物（葡萄糖）中培养——诱导型失酶——反复。 ③显色反应法 不含诱导物平板培养——加底物——分解（有颜色变 化）——检出。 ４.抗（敏感）性突变株筛选 包括：抗生素、金属离子、温度、噬菌体 ①抗生素抗性突变：提高产量； 　②抗噬菌体突变：消除噬菌体污染； 　　（与噬菌体存在与否无关） ③条件抗性突变：如温度，可提高产量； 　　（温度敏感突变，高温呈营养缺陷表型） ④物敏突变： 　　如：氟乙酸抑制顺乌头酸酶，氟乙酸敏感突变型， 　　　　顺乌头酸酶活性极低，更敏感，异柠檬酸产量 　　　　少，柠檬酸积累。 8.3.2 抗分解调节突变株的选育 微生物的