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罗布麻对红细胞膜脂质过氧化损伤的保护作用
罗布麻对红细胞膜脂质过氧化损伤的保护作用
【关键词】? ,罗布麻
摘? 要? 目的 研究罗布麻提取物对红细胞膜脂质过氧化损伤的保护作用。方法 采用三种活性氧产生体系诱发脂质过氧化为实验模型,设立模型对照组(MC),正常对照组(NC),以及剂量分别为0.1,0.2,0.4,0.8 mg/mL的四个罗布麻提取物给药组,观察比较各组的丙二醛(MDA)含量。结果 同MC组相比,四组罗布麻提取物对黄嘌呤-黄嘌呤氧化酶系统,H2O2及UV照射三种方法引起的细胞膜脂质过氧化产物丙二醛(MDA)的生成增加均有抑制作用,且有一定的剂量依赖关系。结论 罗布麻醇提物对自由基引起的细胞膜脂质过氧化损伤有保护作用。
关键词? 罗布麻;自由基;红细胞膜;脂质过氧化
、
细胞膜具有维持细胞完整性和功能的作用。因其富含饱和脂肪酸最易受自由基攻击,自由基对细胞膜的损伤主要是产生脂质过氧化反应,从而引起膜结构和功能的改变。因此,抗氧化剂可有效地防止自由基对细胞膜脂质的过氧化损伤。
罗布麻属于夹竹桃科植物(Apocynum venetum),又名红麻,是生长在盐硷沙荒地区的野生植物,我国罗布麻的资源非常丰富,分布范围小,用罗布麻作茶饮及药用有悠久的历史。现代研究认为其可预防和治疗老年高血压、感冒、气管炎,对增强机体抗病能力均有一定的作用。罗布麻提取物的主要成分为黄酮类化合物[1],而黄酮类化合物由于含有还原性酚羟基,可直接清除氧自由基,抑制脂质过氧化。本文观察了罗布麻提取物对体外黄嘌呤-黄嘌呤氧化酶、过氧化氢(H2O2)和UV照射等三种自由基产生体系诱导细胞膜脂质过氧化的影响,报道如下。
1? 仪器与材料
1.1? 药物与试剂?
罗布麻叶购自武汉市药材公司,经鉴定为Folium apocyni Veneti。黄嘌呤(Xan)和黄嘌呤氧化酶(XO)为Sigma公司产品,考马斯亮蓝蛋白测定试剂盒和丙二醛(MDA)测定试剂盒购于南京建成生物工程研究所,其他试剂均为国产分析纯。
1.2? 动物?
大白兔购于华中科技大学同济医学院动物实验室
1.3? 仪器?? UV-2201紫外分光光度计(日本岛津)、高速冷冻离心机(Sigma 公司)
1.4? 实验药物的制备[2]?
罗布麻叶100 g,用φ=70%乙醇回流提取2次,每次1 h,合并提取液,回收溶剂后,得到浸膏20.9 g。取该浸膏,用蒸馏水配成浓度分别为0.1、0.2、0.4、0.8 mg/mL的溶液,经02 μm微孔滤膜过滤,4 ℃保存备用。
2? 方法与结果
2.1? 方法
2.1.1? 红细胞膜的制备?
兔全血在0~4 ℃用低渗溶血法[3]制备,膜蛋白含量用考马斯亮蓝试剂盒测定,得膜蛋白浓度0.098 g/L[4]。
2.1.2? Xan-XO 体系诱导细胞膜脂质过氧化?
各取细胞膜悬液(0.098 g/L)0.5 mL,分别加待测药物01 mL(对照加pH 7.8磷酸盐缓冲液),置37 ℃水浴15 min,再加1.0 mmol/L Xan溶液0.3 mL,0.4 U/mL XO 0.1 mL, 立即将反应管置37 ℃水浴1 h待测。
2.1.3? H2O2诱导细胞膜脂质过氧化?
以2 mol/L H2O2 (终浓度为18 mmol/L) 代替 Xan-XO,用pH7.8磷酸盐缓冲液补充反应体系的体积至1.0 mL,其余条件同“2.1.2”项。
2.1.4? UV照射诱导细胞膜脂质过氧化?
反应终体积为1 mL,内含细胞膜0.5 mL及不同浓度的药物或等体积的磷酸盐缓冲液,反应管置紫外灯下照射1 h后待测。
2.1.5? 脂质过氧化物的检测?
采用MDA试剂盒测定,测定过氧化脂质降解产物中的丙二醛(MDA)含量以反映脂质过氧化程度。 以下式计算罗布麻对反应体系诱导MDA生成的抑制率:抑制率=对照组MDA含量-给药组MDA含量[]对照组MDA含量-正常组MDA含量×100%
2.1.6? 统计学处理?
MDA数值采用s的形式,多组资料间的两两比较用t检验,P0.05认为有显著性差异。
2.2? 结果
2.2.1? 罗布麻醇提物对Xan-XO体系诱导细胞膜脂质过氧化生成的影响?
结果表明,Xan-XO系统可诱导细胞膜发生脂质过氧化反应,使对照组的MDA含量明显升高(P 0.001);四个罗布麻组的MDA值较对照组均有显著下降,并有一定的剂量依赖关系(P 0.001,P 0.01)。见表1。表1? 罗布麻对Xan-XO诱导细胞膜脂质过氧化生成的影响(略)
2.2.2? 罗布麻醇提物对H2O2诱导细胞膜脂质过氧化生成的影响?? 结果表明,H2O2可诱导细胞膜脂质过氧化反应,使对照组的MD
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