《生理科学实验作业范本》预习报告 蛙神经干动作电位研究.docVIP

实验报告 课程名称： 生理科学实验 指导老师： 陆源 成绩：__________________ 实验名称： 蛙神经干动作电位研究 实验类型：______________ __同组学生姓名：__________ 一、实验目的和要求（必填） 二、实验内容和原理（必填） 三、主要仪器设备（必填） 四、操作方法和实验步骤 五、实验数据记录和处理 六、实验结果与分析（必填） 七、讨论、心得 实验目的和要求 应用微机生物信号采集处理系统和电生理实验方法，测定蛙类坐骨神经干的单相、双相动作电位和其中Ａ类纤维冲动的传导速度，并观察机械损伤、药物对神经兴奋和传导的的影响。探讨神经干双向动作电位形成机制。 学习通过设计具体的实验方法和实验来验证假设。 实验内容和原理 神经受到电刺激后发生去极化，当去极化达到阈电位时，神经纤维膜上产生一次可传导的快速电位反转，称为动作电位(action potential, AP)。将两个引导电极置于兴奋性正常的神经干表面，电刺激后产生的动作电位兴奋波会先后通过两个电极处，引导出两个方向相反的电位波形，称为双相动作电位。机械损伤引导电极间的神经纤维后，兴奋波只能通过第一个引导电极，不能传至第二个引导电极，则只能引导出一个方向的电位偏转波形，称为单相动作电位。 神经干由许多神经纤维组成，故神经干动作电位是由许多不同直径和类型的神经纤维动作电位叠加而成的综合性电位变化，称复合动作电位。动作电位在神经干上传导有一定的速度。不同类型的神经纤维传导速度不同。蛙类坐骨神经干以Aa类纤维为主，传导速度大约30～40m/s 。 本实验测定蟾蜍坐骨神经干复合动作电位（compound action potential ，CAP），探讨蟾蜍坐骨神经干的特性、双相动作电位形成机制及神经损伤、药物对神经兴奋传导的影响。 三、 主要仪器设备 实验动物（laboratory animal) 蟾蜍（中华蟾蜍指名亚种，Zhuoshan Toad） 实验仪器：RM6240多道生理信号采集处理系统、BB-3G标本屏蔽盒 实验药物：任氏液(Ringer`s solution)、4% 普鲁卡因、3 mol/L 氯化钾 操作方法与实验步骤 系统连接和仪器参数设置 （1）系统连接 连接生物信号采集处理系统与标本盒。须避免连接错误或接触不良。 （2）启动RM6240系统软件，进入系统软件窗口，设置仪器参数：点击“实验”菜单，选择“生理科学实验”菜单中的“神经干动作电位”项目。系统进入该实验信号记录状态，仪器参数：1、2通道时间常数0.02s、滤波频率3KHz、灵敏度5mV，采样频率100KHz，扫描速度0.2ms/div。单刺激模式，刺激电压1 V，刺激波宽0.1ms，延迟1ms，同步触发。 蟾蜍坐骨神经干制备 （1）毁脑脊髓。 （2）剥去一侧下肢自大腿根部起的全部皮肤，然后将标本俯卧位固定于蛙板上。 （3）在大腿背内侧的股二头肌与半膜肌之间，纵向分离坐骨神经至腘窝处，并在神经下穿线备用。然后分离腓肠肌的跟腱，穿线结扎，并连同扎线将跟腱剪下，一直将腓肠肌分离至膝关节。在膝关节旁钉一大头针，折弯压住膝关节，至此在体标本制备完成。 （3）剥皮的下肢标本俯卧位置于蛙板上，用尖头镊子夹住骶骨尾端稍向上提，使骶部向上隆起，用粗剪刀水平位剪除骶骨。 （4）标本仰卧置于蛙板上，用玻璃分针分离脊柱两侧的坐骨神经，穿线，紧靠脊柱根部结扎，近中枢端剪断神经干，用尖头镊子夹结扎线将神经干从骶部剪口处穿出。 （5）标本俯卧位置于蛙板上，使其充分伸展呈人字形，用三根大头针将标本钉在蛙板上。然后再用玻璃分针循股二头肌和半膜肌之间的坐骨神经沟，纵向分离暴露坐骨神经大腿部分，直至分离至腘窝胫腓神经分叉处，用玻璃分针将腓浅神经、胫神经与腓肠肌和胫骨前肌分离，将腓肠肌剪除。 （6）用手轻提一侧结扎神经的线头，辨清坐骨神经走向，置剪刀于神经与组织之间，剪刀与下肢成30°角，紧贴股骨，腘窝，顺神经走向，剪切直至跟腱并剪断跟腱和神经。 （7）用手捏住结扎神经的线头，用镊子剥离附着在神经干的组织，将剥离出来的坐骨神经干标本浸入盛有任氏液培养皿中待用。 实验观察 测定中枢端引导的双相动作电位： 用1.0 V 电压，波宽0.1ms的方波刺激神经干末梢端，测定中枢端BAP正、负相振幅和时程。 测定末梢端引导的双相动作电位 用1.0 V电压，波宽0.1ms 的单个方波刺激神经干中枢端，测定末梢端BAP正、负相振幅和时程。 兴奋传导速度的测定 用1.0V电压，波宽0.1ms的单个方波刺激神经干中枢端，测定第1和第2对引导电极引导CAP