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关于消支饮治疗小鼠生殖道解脲支原体感染对血清干扰素-γ 的影响 　　解脲支原体(Uu) 是介于细菌与病毒之间的最小原核微生物, 属于柔膜体纲、支原体科、脲原体属的微生物。主要寄生在人类泌尿生殖道黏膜表面, 女性生殖道感染后可上行至子宫腔和输卵管腔引起相应部位的炎症。针对其病因病机导师梁学林教授制定了以健脾益气, 升阳除湿为主, 佐以清热解毒杀虫的治疗大法, 自拟“消支饮”方治疗本病, 注重扶正祛邪, 固护正气, 尤其对抗生素治疗耐药的患者更为适宜。通过动物实验以中药“消支饮”方, 治疗Uu 感染, 并设西药“阿奇霉素”为对照组, 从小鼠Uu 转阴率、血清干扰素-gamma; 两方面观察“消支饮”的治疗作用。 　　1　材料与试剂 　　1. 1　实验动物　BALB/C 小鼠104 只购于中国医学科学院实验动物研究所, 鼠龄8 周, 雌性, 清洁级, 体重(20plusmn;2)g。 　　1. 2　实验药品及制备　消支饮：由太子参、山药、柴胡、炙甘草、陈皮、白芍、炒荆芥、车前子、苍术、炒白术、黄柏、苦参等中草药组成, 由辽宁中医药大学附属医院中药局制备,浓缩至2 g/ml( 即1 ml 煎液内含有2 g 生药), 灭菌备用。 　　阿奇霉素：石家庄欧意药业有限公司生产, 规格：0.25 g/片,生产批号：国药准字 　　1. 3　主要试剂　Uu 标准株：Uu 血清8 型冻干标准株, 由南华大学微生物教研室提供。复苏并传代后备用。 　　液体培养基：购于珠海丽珠试剂有限公司, 批号：YZB/粤0205-2007。 　　固体培养基：购于上海恩康生物科技有限公司, 批号：YZB/ 沪0948-40-2005。 　　小鼠IFN-gamma; 定量酶联检测试剂盒：购于ADLITTERAMDIAGNOSTIC LABORATORIES, 批号：QRCT-301330101003-EIA/UTL。 　　1. 4　主要仪器及设备　酶联免疫吸收分析仪, 型号Anthos-2010, 用于测定血清IFN-gamma; ;日本奥林巴斯BX51 号显微镜,用于小鼠阴道分泌物Uu 检测观察。 　　2　实验方法 　　2. 1　Uu 菌液制备　将冻于-80℃的Uu 血清8 型标准株置37~45℃水浴中1 min, 使其快速融化, 无菌接种于Uu 液体培养基, 37℃恒温箱培养24~48 h, 见液体培养基由黄变红, 且液体澄清透亮无浑浊、沉淀, 可确认有Uu 生长。取对数生长期Uu 菌液制成2.5times;105 ccu/ml 浓度, 经1000 r/min 4℃离心集菌备用。 　　2. 2　动物造模　在同样条件下, 随机分为A、B、C、D、E、F、G 7 组。模拟Taylor-Robinson 的造模方法, A、B、C、D、E、F 组每只小鼠颈部皮下注射苯甲酸雌二醇0.4 mg, 浓度1mg/ml, 每周1 次, 共4 次。A、B、C、D、E、F 组小鼠在经过雌激素预处理后, 将血清8 型浓度为2.5times;105 cuu/ml 的Uu菌液用留滞针软管取20 mu;l 注入小鼠阴道, 连续给菌3 d。小鼠在接种Uu 1 周后取小鼠阴道分泌物进行检测。用2 支无菌棉签棒伸入小鼠阴道0.5 cm 轻轻转动, 将第1 支棉签在液体培养基(1 ml) 中充分洗脱, 进行液体培养;第2 支棉签接种于Uu 固体培养基平板上。固体和液体培养基均放于37℃孵育箱孵育, 24~48 h 后观察结果, 液体培养基颜色由黄变红且澄清, 固体培养基长出典型“煎蛋样”Uu 菌落, 提示造模成功。 　　2. 3　分组给药治疗　消支饮预防高剂量组(A 组：14 只小鼠,造模同时, 给予中药“消支饮”80 g/(kg·d), 连续给药4 周;消支饮预防低剂量组(B 组) ：14 只小鼠, 造模同时, 给予中药“消支饮”20 g/(kg·d), 连续给药4 周;消支饮治疗高剂量组(C 组)：17 只小鼠, 造模成功后, 给予中药“消支饮”80g/(kg·d), 连续给药3 周;消支饮治疗低剂量组(D 组) ：17只小鼠, 造模成功后, 给予中药“消支饮”20 g/(kg·d), 连续给药3 周;阿奇霉素组(E 组) ：14 只小鼠, 造模成功后,给予西药“阿奇霉素”0.2 g/(kg·d), 连续给药2 周;模型组(F组) ：16 只小鼠, 造模成功后, 给予0.9% 的生理盐水, 连续3 周;空白组(G 组) ：12 只小鼠, 正常饲养, 与模型组同时给予0.9% 的生理盐水, 连续3 周;灌胃量：每10 g 小鼠给0.4ml 的药液, 每天给药1 次。