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分析HPLC 同时测定浙江蜡梅中的成分的含量 　　浙江蜡梅(Chimonanthus zhejiangensis M. C.Liu)为蜡梅科植物，产于浙江南部、福建北部，为一种历史悠久的畲药--“食凉茶”。由于浙江蜡梅具有抗菌、消炎、抗病毒、增强机体免疫力等功效，畲族民间常用它来治疗感冒、咽喉肿痛诸症。关于浙江蜡梅的研究报道极少，而关于畲药“ 食凉茶” 的另一来源柳叶蜡梅(Chimonanthus salicifolius S. Y. Hu)研究较多。柳叶蜡梅相关研究表明黄酮是其重要的活性成分之一，且黄酮具有抗炎、抗菌、抗病毒等药理作用，预实验发现浙江蜡梅中亦含有芦丁、槲皮素、山奈酚，且这三者都稳定存在，故选此为指标性成分。本实验采用HPLC 同时测定浙江蜡梅中这3种成分的含量，旨在为浙江蜡梅质控标准的制定提供科学依据。 　　1 仪器与试药Agilent 1260 　　高效液相色谱仪(美国Agilent 公司);DAD 检测器、XS105DU 电子天平(瑞士梅特勒公司);DL-360D 智能超声波清洗器(功率360 W，频率40 kHz，上海之信仪器有限公司)。芦丁(批号：100080-200707，含量90.5%)、槲皮素(批号：100081-200406，含量97.3%)、山奈酚(批号：110861-201310，含量：93.2%)均购自中国食品药品检定研究院。甲醇、乙腈、磷酸均为色谱纯，水为娃哈哈纯净水。药材自行采集或市场购入，由本院李晓峰副主任中药师鉴定为浙江蜡梅Chimonanthus zhejiangensis M.C.Liu 的干燥叶。 　　2 方法与结果 　　2.1 色谱条件 　　Agilent Zorbax SB-C18 色谱柱(4.6 mmtimes;250 mm，5 mu;m);流动相为乙腈-0.1%磷酸溶液，梯度洗脱(0~10 min，18%rarr;30%乙腈;10~24 min，30%rarr;45%乙腈)，流速为1.0 mL·min?1，柱温30 ℃;检测波长为360 nm;进样量均为5 mu;L。 　　2.2 对照品溶液的制备 　　精密称取芦丁、槲皮素、山奈酚对照品适量，分别加70%甲醇制成每1 mL 含芦丁、槲皮素、山奈酚含量分别为1.014 3，0.686 1，0.325 4 mg·mL?1的3 种对照品储备液。精密吸取上述储备液制成芦丁、槲皮素、山奈酚含量分别为202.86，34.31，21.69 mu;g·mL?1 的混合溶液，作为对照品溶液。 　　2.3 供试品溶液的制备 　　取本品过2 号筛粉末约0.5 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入70%甲醇25 mL，密塞，称定重量，超声处理60 min，放冷至室温，再称定重量，用70%甲醇补足减失的重量，摇匀，用0.45 mu;m 的微孔滤膜过滤，取续滤液做为供试品溶液。 　　2.4 系统适用性试验 　　分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液，按“2.1”项下色谱条件进样，记录色谱图。在该色谱条件下，芦丁、槲皮素和山奈酚与其他成分可达到基线分离，分离度均gt;1.5 ， 理论板数均gt;30 000，具有良好的分离效果。 　　2.5 线性关系考察精密 　　吸取各对照品储备液适量，制成芦丁浓度分别为4.057，12.18，60.86，152.1，338.1，507.2 mu;g·mL?1，槲皮素浓度分别为0.686 1，6.861，20.58，34.31，91.48，171.5 mu;g·mL?1，山奈酚浓度分别为0.216 9，1.302，10.85，21.69，57.85，81.35 mu;g·mL?1 的混合对照品溶液，各精密吸取5 mu;L，按“2.1”项下色谱条件进行测定，分别以峰面积Y 和对照品含量X 进行回归分析，得芦丁回归方程为Y=16.097X?147.17，r=0.999 3，槲皮素回归方程为Y=41.136X?140.36，r=0.999 6，山奈酚回归方程为Y=48.992X?5.1356，r=0.999 9。结果表明：芦丁、槲皮素和山奈酚分别在4.057~507.2，0.686 1~171.5，0.2169~81.35 mu;g·mL?1 内呈良好的线性关系。 　　2.6 仪器精密度试验 　　取对照品溶液，按“2.1”项下色谱条件连续进样5 次，记录峰面积，计算得芦丁、槲皮素、山奈酚峰面积的RSD 分别为0.33%，0.39%，0.33%，表明仪器精密度良好。 　　2.7 重复性试验 　　取同一批浙江蜡梅，平行取样6 份，按“2.3”项下方法制备供试品溶液，并按“2.1”项下